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分光光度计的使用及原理介绍

阅读:2367发布时间:2014-7-31

  导读:分光光度计属于精密仪器,应当妥善保管和精心维护,这样才能保证分光光度计长期使用、长期的稳定可靠、测量精度高。元析公司在多年的生产和应用的过程中,得到了一套在一定环境下维护分光光度计的经验,具体如下:
  
  1、环境温度在条件容许的情况下,尽量保持在15-30摄氏度之间,这样能保持电器件稳定工作,不易老化,使分光光度计不易损坏,灯源的使用寿命得到延长。若条件不容许,在高温的情况下,缩短开机时间,使用分光光度计,使电器件不要长期保持在高温下。在低温下,使预热时间比常温下的预热时间要长,这样能保证在仪器稳定的情况下进行测试。
  
  2、环境湿度在条件容许的情况下,尽量保持在60%以下,这样能保证光度计内部的光学件和电器件不易受潮、腐蚀、和上霉。若条件不容许,在高湿度和低湿度的情况尽量保持通风。
  
  3、环境在条件容许的情况下尽量保持洁净,打扫环境时动作不宜太大,不要扬起灰尘,打扫之前用防尘罩盖上分光光度计,不要让灰尘进入分光光度计内部。
  
  分光光度计类型,及应用领域:
  
  分光光度计有哪几种不同的分类方式:
  
  1.分光光度计按照波长及应用领域的不同可以分为:
  
  (1)可见光分光光度计:测定波长范围为400~760nm的可见光区;
  
  (2)紫外分光光度计:测定波长范围为200~400nm的紫外光区;
  
  (3)红外分光光度计:测定波长范围为大于760nm的红外光区;
  
  分光光度计zui常见的用途和常用波长:
  
  1.核酸的定量
  
  核酸的zui高吸收峰的吸收波长260nm。利用260nm的波长可以定量测量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA的浓度。
  
  除了核酸浓度,分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度。如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
  
  A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,*等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。
  
  A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品,A320一般是0。
  
  2.蛋白质的直接定量
  
  这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。
  
  3.细菌细胞密度
  
  细菌培养过程中,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。
  
  OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。在600nm波长下,以未加菌液的培养液作为空白液,测量定量培养后的含菌培养液。
  
  (4)荧光分光光度计:用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱;
  
  (5)原子吸收分光光度计:光源发出被测的特征光谱辐射,被经过原子化器后的样品蒸气中的待测元素基态原子所吸收,通过测定特征辐射被吸收的大小,来求出被测元素的含量。
  
  2.分光光度计按自动化程度分类:可分为手动、半自动、自动分光光度计。
  
  3.分光光度计按软件可分为:带扫描、不带扫描。

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