关于客户在收到细胞后正确的处理方法

脐静脉内皮细胞，HuUVECs-11细胞

 有经验和刚刚从事细胞培养工作的人员都应该认真仔细地询问下细胞提供方提供的建议，提前了解所要培养细胞的详细资料，准备好细胞所要用到的培养基和相关试剂，虽然所有的贴壁，半贴壁或者悬浮细胞处理方式差不多，但是不同的实验室培养条件和处理力度还有试剂的批间差这些问题存在，也会导致对细胞处理不当，或者环境的不适应而造成细胞的死亡。

脐静脉内皮细胞，HuUVECs-11细胞

 1.收到细胞，*时间要镜检：观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好，观察细胞密度，有疑议及时咨提供细胞的技术人员。由于运输的时间或者温度的变化，很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样，主要是贴壁牢固问题。比如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶子里面，会发生大片的脱落，细胞聚集在一起，但是细胞生长还是正常的，通过离心收集，加以*的消化，重新打散，又可以正常的贴壁生长。

2.当通过上一步的观察，细胞初步没有任何问题时，进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中大部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生*，必须恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生*的状态，在对数生*进行细胞的传代会大大增加传代的成功率，和细胞的存活率。

3.如果经*步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很好时，则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶；对于生长较慢，细胞比较薄，状态容易波动的细胞类型，一次少传些，保证每瓶细胞密度大些，便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞，*次处理也可以依照第二种情况。

收到细胞后，在倒置显微镜下观察细胞生长状态：

如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培

养液，继续培养。

如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。

传代方法：

1 弃去培养基，用不含钙、镁离子的PBS 洗1-2 次。

2 加1ml 0.25%的*（含0.02%EDTA），让*与大部分细胞接触后

放入37℃培养箱内，随时观察细胞状态变化，待细胞大部分变圆后加

*培养基终止消化。

3 一般没有特殊说明，细胞一般是一传二。

冻存方法：

70% *培养基，20%FBS，10%DMSO，现用现配。

储存：液氮中*保存。

注1 观察细胞在低倍镜下观察，便于整体估计细胞密度。

2 在运输过程中可能会导致一些贴壁不牢的细胞发生部分脱落，可离

心吹打后重新种入瓶中培养。

3 收到细胞后若发现培养瓶破损、细胞污染等，请及时与我们。

，还可供应细胞如下：