细胞名称:小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,RAW 264.7细胞
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,RAW 264.7细胞
传代方法:
收到细胞后,在倒置显微镜下观察细胞生长状态:如果没长满,将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液,继续培养。
如果细胞已经长满(约80%-90%)则传代后继续培养。
贴壁细胞传代方法:
1 弃去培养基,用不含钙、镁离子的PBS 洗1-2 次。
2 加1ml 0.25%的*(含0.02%EDTA),让*与大部分细胞接触后放入37℃培养箱内,随时观察细胞状态变化,待细胞大部分变圆后加*培养基终止消化。
悬浮细胞传代方法:
可以直接传代也可以离心法传代。
1.直接传代是让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2-2/3,吹打细胞形成细胞悬液后,分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。
2.离心法传代是将细胞连同培养液一并转移到离心管内,1000rpm,5 分钟,去除上清,加新的培养液到离心管内,吹打细胞形成细胞悬液后,分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。一般没有特殊说明,细胞一般是一传二。
冻存方法:
90%FBS,10%DMSO,现用现配。
储存:液氮中*保存。
注:1 观察细胞在低倍镜下观察,便于整体估计细胞密度。
2.在运输过程中可能会导致一些贴壁不牢的细胞发生部分脱落,可离心吹打后重新种入瓶中培养。
3.收到细胞后若发现培养瓶破损、细胞污染等,请尽快与我们。
常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞*可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
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