β胰岛素瘤,RIN-m5F
【研究范围】仅供科研使用
【细胞特征】每两到三天进行换液。细胞应当在融合前传代
【细胞培养表述】
一、态观察。细胞膜是每天必须观察的,看是否清晰,细胞的死亡往往是从细胞膜的破裂开始的,早期的表现就是细胞膜某一点出现欠完整或者毛发影。
二、细胞往往会有“抱团"现象,抱团生长或死亡,个人认为应该勤换液或传代,尽量避免细胞抱团。
三、长迅速,强烈建议用较大的培养瓶养,用小瓶养的话,换液不及时,很容易死亡。细胞的生长速度一般为2天左右就需要传代,并且一般为一传三,或一传四。
四、培养液:1640培养液,1L一般加*2g,并加双抗,胎牛血清浓度*为12%,zui低不低于10%,细胞对胎牛血清高度依赖。培养液PH应调为7.20-7.40之间。
五、防污染。细胞生长迅速,较少发生污染,但常规措施应该做好。比如无菌操作,酒精消毒等,培养瓶口建议过火,包括瓶盖,应过火4秒左右。
六、冻存。-20一小时,-80一夜,液氮*保存。强烈建议液氮*保存,尽量不要在-80*保存,死亡率很高。
七、复苏。调节水浴箱温度为42℃,并提前在试管内放置10倍培养液,使培养液温度与室温*。1分钟内融化细胞(禁止摇晃冻存管),移取至试管内,动作要轻,从试管管底开始慢慢上提移液管,使细胞在培养液内分布均匀,离心,洗2次。
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