植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定
一、目的
从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，也可以作为鉴定其品质的重要指标，另外也有助于训练基本操作技能。
二、原理
（一）、分离提取原理
在80%～85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），zui后用0.1mol/L氢氧化钠溶解蛋白质。选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。
（二）、测定原理
1、蒽铜比色法——可溶性糖含量测定
碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽铜脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量呈现性关系。蒽铜反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10min后出现，而核糖在相同温度下，加热3min后出现。此法灵敏度高，糖含量达30ug即可测定。
2、茚三酮比色法——氨基酸含量测定
氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570nm下有zui大光吸收。在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。
3、考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定
考马斯亮蓝G-250在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为青色，后者zui大光吸收在595nm，在一定范围内，其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。此法快速灵敏，反应在2min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。
三、实验用品
（一）、实验材料
植物样品
（二）、器皿
1、25mL刻度试管×8,15mL试管×20.
2、10mL离心管×2
3、容量瓶：50mL×1,25mL×1
4、移液管：5mL×2,2mL×4,1mL×2,0.1×2.
5、洗耳球
6、恒温水浴锅
7、离心机
8、电子天平
9、分光光度计
（三）、试剂
1、样品分离提取
（1）、、80%乙醇
（2）、9.2mol/L高氯酸，4.6mol/L高氯酸
（3）、0.1mol/L氢氧化钠
2、可溶性糖及淀粉测定
（1）、葡萄糖标准液：0.1g*溶于蒸馏水中，定容至1000mL。
（2）、硫酸-蒽酮试剂：0.2g蒽酮，1g硫脲，缓缓加入100mL浓硫酸，边加边搅拌，溶解后呈黄色透明溶液，储于棕色瓶中，4℃冰箱中保存。
3、氨基酸测定
（1）、60%乙醇
（2）、水合茚三酮：1.2g茚三酮，加入30mL正丙醇，搅拌使其溶解，再加入60mL正丁醇和120mL乙二醇，zui后加入18mL pH5.4的乙酸-乙酸钠缓冲液混匀，储于棕色瓶，4℃冰箱中保存。
（3）、乙酸-乙酸钠缓冲液：乙酸钠54.4g，加入100mL蒸馏水，在电炉上加热至沸，使体积蒸发至原体积的一半，冷却后加30mL冰醋酸，用蒸馏水稀释至100mL。
（4）、标准氨基酸：取80℃下烘干的*20mg，溶解在10%的异丙醇中，并用10%异丙醇稀释至10mL，取5mL用蒸馏水稀释至50mL。
（5）、0.1%抗坏血酸：50mg抗坏血酸溶于50mL蒸馏水中。现用现配。
4、蛋白质含量测定
（1）、牛血清蛋白质标准液：100mg牛血清白蛋白溶于100mg蒸馏水中，储于4℃冰箱中，
（2）、考马斯亮蓝G-250溶液：100mg考马斯亮蓝G-250溶解于50mL95%乙醇中，加入85%磷酸mL，用蒸馏水定容至1000mL。
四、操作步骤
（一）、分离提取
每次离心转速3000～3500r/min
（二）、测定
1、可溶性糖及淀粉的测定
（1）、制作标准曲线
加入硫酸-蒽酮试剂时，将各管放在冷水中，沿管壁缓缓加入，全部加完后再混匀。将以上各管在100℃水浴中加热10min，取出后用自来水冷却，620nm比色测定。
（2）、样品测定
取可溶性糖提取液1mL+1mL蒸馏水，显色与标准曲线相同
2、淀粉测定
吸取上述淀粉提取液2mL于大试管中，用测定可溶性糖的方法测定。
3、游离氨基酸含量测定
（1）、制作标准曲线
加完试剂后混匀，置沸水浴加热15min，然后取出放在冷水中迅速冷却并摇动，使加热时形成的红色逐渐被氧化而褪色，直至溶液呈紫色时，用60%的乙醇定容至10mL，混匀，570nm比色测定。
（2）、样品测定
吸取上述样品提取液2mL，显色与标准曲线相同。
4、蛋白质含量测定
（1）、制作标准曲线
混匀后，分别准确吸取各试管0.1mL至另外6个试管中，加5mL考马斯亮蓝G-250试剂，混匀，放置2min后595nm比色测定。
（2）、样品测定
准确吸取蛋白质提取液0.1mL，显色与标准曲线相同。
