人β干扰素（IFN-β）试剂盒（ELISA）
阅读：87发布时间：2017-2-22
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人β干扰素（IFN-β）的含量。?有效期：6个月?保存条件：2-8℃实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人β干扰素（IFN-β）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人β干扰素（IFN-β）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样本处理及要求1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。需要而未提供的试剂和器材1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱4.蒸馏水或去离子水 试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板8孔×12条8孔×6条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无*6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无备注：1. 标准品浓度依次为：24、12、6、3、1.5、0 ng/mL2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过zui大标准品浓度时，可用*将标本进行适当稀释后再进行实验。注意事项1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。3.消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。6.在储存和温育时避免强光直接照射。7.平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。9.不能使用过期产品。10.如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。试剂准备试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。实验结果计算以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。试剂盒性能1. 检测范围：0.75 ng/mL – 24 ng/mL。2. 灵敏度：zui低检测浓度小于0.1 ng/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。
