总*(T-CHO)试剂盒说明书
For Research Use only
仅供研究用
货号：QYS-239461
COD-PAP 法 96T
- 试剂组成及配制:
试剂组成 | 规 格 | 组 份 | 浓 度 | 保存条件 |
酶液 |
25ml×1 瓶 | Good’s 缓冲液 | 50mmol/L，pH6.7 |
2～8℃ 避光保存 |
* | 5mmol/L | |||
4-AAP | 0.3mmol/L | |||
*酯酶 | ≥50KU/L | |||
*氧化酶 | ≥25KU/L | |||
过氧化物酶 | ≥1.3KU/L | |||
校准品 | 0.1ml×1 瓶 | * | 见标签 | |
附送 96 孔平底酶标板一块 | 室温放置 | |||
- 测定原理：
*酯 | CE | * | + | 脂肪酸 |
→→→ |
* | + | O2 | CO | Δ | 4 | 胆甾烯酮 | + | H2O2 |
→→→ |
|
H2O2 | + | 4-AAP | + | 3,5-DHBS | POD | 红色醌化物 | + | H2O |
→→→ |
生成的醌类化合物颜色的深浅与*的含量成正比，分别测定校标准管和样本管的吸光度值，计算*的含量。
- 操作过程:
- 样本处理:
①、血清(浆)：直接测定，如超过线性范围用生理盐水稀释后测定。
②、培养液样本：吸取培养液，1000 转/分，离心 10 分钟，取上清测定。
[注]：一般建议细胞密度在 100 万个/ml 以上。
③、组织样本：准确称取组织重量，按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的匀浆介质，冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分，离心 10 分钟，取上清液待测。
[注]:1、如组织样本不存在高脂样本，匀浆介质统一用磷酸盐缓冲液(0.1mol/L pH 7.4)或生理盐水进行提取。
2、如组织样本为高脂样本或部分为高脂样本，匀浆介质统一用无水乙醇进行提取。
④、细胞样本：
A、细胞收集:将制备好的细胞悬液取出，1000 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，留细胞沉淀；用等渗缓冲液（* 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液）清洗 1～2 次，同样 1000 转/分，离心 10 分钟，弃上清液，留细胞沉淀；
B、细胞破碎:加入 0.2～0.3ml 的匀浆介质（* 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水）进行匀浆，冰水浴条件下超声破碎(功率 300W，3～5 秒/次，间隔 30 秒,重复 3～5 次) 或手动匀浆， 制备好的匀浆液不离心直接测定。也可采用裂解液裂解( *TritonX-100,1～2%,裂解 30～40 分钟)，裂解好的液体不离心直接测定。
[注]：一般建议收集的细胞密度在 100 万个/ml 以上。破碎好的液体可显微镜观察细胞是否破碎*
- 操作表：
96 孔板操作,酶标仪比色 | |||
| 空白孔 | 校准孔 | 样本孔 |
蒸馏水（μl） | 2.5 |
|
|
校准品（μl） |
| 2.5 |
|
样本（μl） |
|
| 2.5 |
工作液（μl） | 250 | 250 | 250 |
混匀后 37℃孵育 10 分钟，波长510nm 处，酶标仪测定各孔吸光度值。
全自动上机操作 | |||
样本量/水 | Sample Volume | μl | 2.5 |
工作液 | reagent | μl | 250 |
37℃孵育 10 分钟,工作液+蒸馏水调零,测定光吸收值 A。 | |||
主波长 | Main wavelength | nm | 510 |
反应类型 | Reaction type |
| 终点法 |
反应方向 | Reaction direction |
| 升反应(+) |
四、计算公式及举例:
1.血清等液体样本计算公式:
酶标仪比色: | *量 | = | 样本OD值- 空白OD值 | X | 校准品浓度 |
(mmol/L) | 校准OD值- 空白OD值 | (mmol/L) |
*: | *量 | = | A样 | X | 校准品浓度 |
(mmol/L) | A校 | (mmol/L) |
- 取正常人血浆2.5μl，按操作表操作，得空白孔吸光度0.0443，校准孔吸光度0.2344，样本孔吸光度0.1724，则计算如下：
总*含量 | = | 样本OD值- 空白OD值 | X | 校准品浓度 | = | 0.1724-0.0443 | X | 5.17 | = | 3.4838mmol/L |
(mmol/L) | 校准OD值- 空白OD值 | (mmol/L) | 0.2344-0.0443 |
- 取大鼠血浆2.5μl，按操作表操作，得空白孔吸光度0.0443，校准孔吸光度0.2344，样本孔吸光度0.1011，则计算如下：
总*含量 | = | 样本OD值- 空白OD值 | X | 校准品浓度 | = | 0.1011-0.0443 | X | 5.17 | = | 1.5447mmol/L |
(mmol/L) | 校准OD值- 空白OD值 | (mmol/L) | 0.2344-0.0443 |
2.组织、细胞计算公式:
酶标仪比色: | *含量 | = | 样本OD值- 空白OD值 | X | 校准品浓度 | ¸ | 待测样本蛋白浓度 |
(mmol/gprot) | 校准OD值- 空白OD值 | (mmol/L) | (gprot/L) |
*: | *含量 | = | A样 | X | 校准品浓度 | ¸ | 待测样本蛋白浓度 |
(mmol/gprot) | A校 | (mmol/L) | (gprot/L) |
a、取10%小鼠肝匀浆2.5μl，按操作表操作，得空白孔吸光度0.0452，校准孔吸光度0.2350，样本孔吸光度0.1038，同时测得10%小鼠肝匀浆蛋白浓度为12.0121gprot/L，则计算如下：
总*含量 | = | 样本OD值- 空白OD值 | X | 校准品浓度 | ¸ | 待测样本蛋白浓度 | ||||||
(mmol/gprot) | 校准OD值- 空白OD值 | (mmol/L) | (gprot/L) | |||||||||
= | 0.1038-0.0452 | X | 5.17 | ¸ | 12.0121 | = | 0.1329mmol/gprot | |||||
0.2350-0.0452 | ||||||||||||
五、产品描述：
本试剂盒采用 COD-PAP 法配制，用于体外测定总*含量。适用于各型酶标仪、半自动或*
六、性能指标：
1、试剂空白管吸光度≤0.100（光径0.5cm）。
2、线性：0～10.34mmol/L 范围内，r2＞0.995。
3、精密度：CV≤3%，批间相对极差≤5%。
4、稳定性：原装试剂盒在 2℃～8℃避光保存，有效期为 12 个月。开启后 2℃～8℃避光保存，可稳定 3 个月。
七、注意事项：
1、本产品仅用于科研，不得用于临床诊断，切勿服用。
2、样品含量如超出检测范围上*，可用生理盐水稀释样本后进行测定，测定结果乘以稀释倍数。
3、试剂防止葡萄糖、*等试剂的污染。
4、试剂与样本量可按照*的要求，按照 1：100 的比例增减
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