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细胞:H1573细胞
中文名称:人肺腺癌细胞
生长特性:贴壁
培养基:DMEM-H培养基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
H1573细胞传代:
1):细胞密度约80%时,吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意根据实际情况,把握消化时间)。
2):镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时;
(可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处,即可肉眼可见细胞层脱落,或吹打后镜下观察吹打处,即消化完成,否则继续消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。
3):取部分细胞悬液转移到新的培养皿中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。
4):注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
(网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;)
非洲猪瘟病毒(ASFV)核酸检测
实验标本采集:
猪肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织:采集可疑病死猪或捕杀病猪疑似组织约1g左右,置入1.5ml洁净EP管,立即送检。
血清:
用一次性无菌注射器抽取受检猪耳静脉或者前腔静脉静脉血2-5ml,静置斜放待血清析出, 1,0000rpm离心3分钟,可取上清立即用于测试;
或吸取上部血清(约500µl)转入无菌1.5ml Eppendoff管,立即送检。
细胞保存和运输:上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃。但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
样品处理:
血清或病毒液:取液体标本约50μl,转至1.5ml洁净离心管中,加50μl核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液3μl进行PCR扩增。
肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等固体组织:
取约200mg固体组织,用生理盐水洗净表面残余血液,转至研磨器中,加1ml生理盐水,研磨成组织匀浆,取50μl组织匀浆液转至1.5ml洁净的离心管中,加50μl核酸提取液B(内含不溶物质,用前需室温溶解并充分混匀),充分混匀,100℃裂解10min,4℃13,000g离心3min,取上清液3μl进行PCR扩增。
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