HA1800细胞培养（人正常星形胶质细胞）

细胞：HA1800细胞

中文名称：人正常星形胶质细胞

生长特性：贴壁

培养基：1640 培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

HA1800细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

巴贝斯虫(BBS)核酸检测：

标本采集、保存与运输

适用标本：疑似动物(牛)全血红细胞。

标本采集：全血：无菌注射器抽取待检者静脉血2ml，置于Na2EDTA或枸橼酸na抗凝管中，充分混匀，密闭送检。

实验标本保存：上述标本应立即送检，标本运送请用冰壶。

实验方法：

DNA提取：

全血标本预处理（按下述步骤操作，用户也可用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞）。

1：将抗凝血摇匀，取500μl转至一洁净的1.5ml 离心管中，编号标记。

2：加入1ml 1×红细胞裂解液(RCLB,试剂盒配备10×RCLB，使用前请用双蒸馏水按1：9比例配制成1×RCLB)，剧烈震荡30s，10,000g离心5min，弃上清。

3：重复 1.1.2  两至三次至无明显红色沉淀。

4：加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，13,000g离心3min，弃上清。

阴性质控品：取50μl阴性质控品，加50μl核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。

BBS阳性质控品：直接取4μl进行PCR扩增，或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。