M109细胞（小鼠肺癌细胞）

细胞：M109细胞

中文名称：小鼠肺癌细胞

生长特性：贴壁

培养基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

M109细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

蓝舌病毒(BTV)核酸扩增检测：（RNA提取）

①样品处理：

1）：脾、肝、肾、淋巴结等固体组织、库蠓：取50mg左右组织或100个左右库蠓用玻璃匀浆器匀浆或液氮研磨成组织匀浆，加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents），研磨或振荡至匀浆状，转移到1.5ml的EP管中，室温放置5min。

2）：血清、精液或病毒液：取100μl血清、精液或病毒液加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。

库蠓：直接取200-300个库蠓，加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。

②：加入100μl氯仿，用力震荡15s，室温静置5min， 4℃ 13,000rpm离心5min。

③：小心将上层水相转移到干净离心管中，加300 μl 无水乙醇，另加10μl RNA提取液B（内含不溶物，使用前室温溶解并充分混匀），充分混匀，13,000rpm离心1min。

④：弃上清，加入500 μl 75%的DEPC乙醇，充分混匀，13,000rpm离心1min，小心吸去大部分乙醇。

⑤将提取管敞口在室温空气中干燥5min待乙醇挥发干净，用20µl DEPC H2O溶解沉淀。(重要提示：RNA提取液B内含不溶物，使用前请13,000瞬时离心10s)

阴性质控品：取100μl阴性质控品加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震荡，室温放置5min。后按②-⑤操作。

BTV阳性质控品：直接取3μl进行PCR扩增。