MRGEC细胞（小鼠肾小球内皮细胞）

细胞：MRGEC细胞

中文名称：小鼠肾小球内皮细胞

生长特性：贴壁

培养基：1640 培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

MRGEC细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

采用RT-PCR方法从人外周血白细胞总RNA中钓取人可溶性b淋巴细胞刺激因子的cDNA片段,再运用基因重组手段, 利用通用型质粒pBV220构建表达载体pBV220/hsBLyS. 

（人Caov-4细胞 卵巢癌细胞）（人CoC1细胞 卵巢癌细胞）

经测序鉴定后, 以之为模板使用重叠PCR法扩增得到hsBLyS的两个点突变体hsBY-A(Cys146→Ala146) 和hsBY-V (Cys146→Val146)的基因片段, 构建表达载体pBV220/hsBY-A及pBV220/hsBY-V. 

（人CoC1/DDP细胞 卵巢癌细胞耐药株）（小鼠E.G7-OVA细胞 T淋巴瘤细胞）

经测序无误后, 将上述3种载体分别转化大肠杆菌DH5α并诱导重组蛋白质表达, 薄层扫描结果显示3种蛋白质在DH5α中表达量都在20%--30%之间. 

（人ES-2细胞 卵巢透明细胞癌细胞）（人H4细胞 神经胶质瘤细胞）

再分别运用变性、凝胶过滤层析及复性等手段纯化目的蛋白质, 最后通过B淋巴细胞增殖实验检测纯化产物促人B细胞增殖的活性. 

（人HaCaT细胞 永生化表皮细胞）（人HBL-100细胞 乳上皮细胞）

实验结果表明, 3种重组蛋白质都能明显刺激人B细胞增殖；统计学检验显示, 突变体rhsBY-V较野生型rhsBLyS的促人B淋巴细胞增殖活性显著增强.