人白细胞分化抗原配体40(CD40/TNFRSF5)ELISA测定试剂盒厂家
产品规格:48孔(T)/96孔(T)
品牌:仁捷生物
代测服务:全程ELISA实验技术指导,免费代做实验(从标本收集、保存、预试验、实验、数据分析等全实验过程提供完整的技术指导。)
特点:重复性好、灵敏性高、特异性强
运输:快递(生物干冰或冰袋运输)2-3天。
我司ELISA试剂盒检测样本齐全:(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Monkey, Pig……)用于测定血清,血浆,组织及相关液体等样本。
人白细胞分化抗原配体40(CD40/TNFRSF5)ELISA测定试剂盒厂家操作注意事项:
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
人白细胞分化抗原配体40(CD40/TNFRSF5)ELISA测定试剂盒厂家上海仁捷生物科技有限公司“质量是企业是生命之源”,选购ELISA检测试剂盒,优势如下:
(1)*抗体——高效、灵敏、特异
(2)规范包被操作——吸附均匀、吸附性好、空白值低、空底透明度高
(3)*的优化方案——回收利用率高、可靠性强
(4)适用于体液、组织匀浆,细胞培养上清液、尿液等各种类型的样本。
(5)可检测指标齐全:生长因子、炎症因子、脂肪因子、基质金属蛋白酶等等X
我司ELISA试剂盒样本处理方法汇总表及计算解析:
一、液体样本
液体样本处理原则:所有的液体样本,用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),如果以后碰到其他的液体样本,也按这个方法,纳入汇总表。
1、血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA、*或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3、尿液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
4、胸腹水:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5、脑脊液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6、唾液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
7、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
8、牛奶:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
9、蜂蜜:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
10、全血:用含有抗凝剂的无菌管收集,立即轻轻摇动,来回轻轻颠倒数次,使血液和抗凝剂混匀,以防血液凝固。
二、固体样本
固体样本处理原则:称取1g的固体样本,用9g的合适缓冲液溶解,分泌蛋白可以直接离心取上清检测,细胞内的蛋白,要先收集细胞,再用合适方法破碎,离心取上清测试。
1、组织标本:切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在液氮中充分研磨;
2、细胞内蛋白样本
许多待测蛋白不是分泌蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。
(1)培养的细胞
A、动物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,就采用超声波破碎),以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
B、植物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右,置于冰盒上,用超声破碎仪,设置破碎2s,冷却30s的方式,充分破碎细胞,以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)组织的细胞
切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。
3、土壤:称取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。
4、*:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解*头部,摇匀,用镊子取出*并挤干液体,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。
5.植物标本中相关酶或蛋白的测定:(粗提取)
1、新鲜植物组织请在液氮中充分研磨;
2、加入样品体积9倍的提取液(pH?7.4PBS缓冲液),3、请于4度,8000rpm,离心30分钟,取上清并暂时保存于4度待用。
三、样本收集注意事项
1、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2、标本采集后尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3、我们罗列的是通用的样本处理方法,无法涵盖各种样本,对于一些特殊样本,建议实验人员多参考已发表的文献,自行设计合理的样本处理方法。
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计算方法示例:绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。将样本的OD值为X值代入方程式,所得的Y值即是我们的样本值。(如下图所示)