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大鼠转化生长因子β酶联免疫分析法

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所在地上海

更新时间:2018-12-28 22:27:24浏览次数:447次

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大鼠转化生长因子β酶联免疫分析法
试剂盒种属:豚鼠、兔子、人、小鼠、犬、鸡、羊、猪、牛、大鼠、马、猴、各类植物等种属标本操作简单、快速、敏感性高、特异性强、产品质量稳定、可靠、竭诚期待与老师*合作!

大鼠转化生长因子β酶联免疫分析法 实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠转化生长因子β(TGF-β)水平。用纯化的大鼠转化生长因子β(TGF-β)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子β(TGF-β),再与HRP标记的TGF-β抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β(TGF-β)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人大鼠转化生长因子β(TGF-β)浓度。

试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批间应分别小于9%和11%
大鼠转化生长因子β 检测范围:10ng/L -200ng/L   
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:270ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

大鼠转化生长因子β酶联免疫分析法 

操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180ng/L,120ng/L ,60ng/L,30ng/L, 15ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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