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包涵体微量纯化试剂盒

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产品参考价:¥990 举报
产品型号:
牌: 联迈生物
厂商性质: 生产商
地: 上海市
更新时间: 2018-06-15 13:30:27
浏览次数: 19
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产品简介

包涵体微量纯化试剂盒包涵体(Inclusion Body)是指细菌表达(主要是大肠杆菌)的蛋白在细胞胞浆内(对胞浆蛋白)或膜间内(对分泌蛋白)凝集形成的无活性的固体颗粒。包涵体形成的主要原因是在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白折叠辅助因子,或环境不适导致无法形成正确的蛋白质次级键。由于包涵体主要由重组蛋白质组成,因此分离纯化包涵体是分离纯化具有活性的重组蛋白的第一步。本产品就是用于快速的提取高质量

详细介绍

 

包涵体微量纯化试剂盒

名称

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包涵体微量纯化试剂盒

20次

990元

 

包涵体(Inclusion Body)是指细菌表达(主要是大肠杆菌)的蛋白在细胞胞浆内(对胞浆蛋白)或膜间内(对分泌蛋白)凝集形成的无活性的固体颗粒。包涵体形成的主要原因是在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白折叠辅助因子,或环境不适导致无法形成正确的蛋白质次级键。由于包涵体主要由重组蛋白质组成,因此分离纯化包涵体是分离纯化具有活性的重组蛋白的第一步。本产品就是用于快速的提取高质量的包涵体。它具有下列特点:

1. 操作简单快速,整个过程只要三十分钟左右。

2. 微量纯化,可以在1.5 mL离心管中完成。

3. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份,使重组蛋白所占比重达到60%以上。

4. 细胞裂解通过非离子洗涤剂的化学裂解法,裂解更加温和。

5. 得到的包涵体可以用于重折叠。

RNA提取法:试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤:
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离,当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复原来的构型,保存在溶液中,而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心,染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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