芴甲氧羰基二聚乙二醇丙酸 872679-70-4 PEG 分子生物试剂
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多点突变试剂盒本试剂盒是利用一对设计特殊的锚定引物（Anchor Primer）及几条定点突变引物对DNA多个不同位点同时进行定点突变的试剂盒。锚定引物“尾巴"上的特异性序列是与大多数基因都不相匹配的，因此保证了PCR扩增的特异性。本试剂盒的主要原理是：设计合成同一方向的锚定引物及定点突变引物，将锚定引物及定点突变引物用T4聚核苷酸激酶磷酸化后与模板质粒DNA进行退火，再使用T4 DNA聚合酶和T
多点突变试剂盒
名称 | 规格 | 价格 | 手册 |
多点突变试剂盒 | 20次 | 询价 |
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本试剂盒是利用一对设计特殊的锚定引物（Anchor Primer）及几条定点突变引物对DNA多个不同位点同时进行定点突变的试剂盒。锚定引物“尾巴”上的特异性序列是与大多数基因都不相匹配的，因此保证了PCR扩增的特异性。本试剂盒的主要原理是：设计合成同一方向的锚定引物及定点突变引物，将锚定引物及定点突变引物用T4聚核苷酸激酶磷酸化后与模板质粒DNA进行退火，再使用T4 DNA聚合酶和T4 DNA连接酶进行延伸和连接形成突变单链，然后使用锚定引物“尾巴”上的特异性引物（ETail F/ETail R）和高保真DNA聚合酶对突变单链进行PCR扩增，再将获得的双链PCR产物克隆回原载体中，即可达到实验目的，获得目的突变体。本试剂盒操作快速简单，只需一天时间便可以完成整个突变操作。本试剂盒尤其适用于插入片段长度在1.0 kb以下的多位点基因突变实验，对于1.0 kb以上的DN段的多位点基因突变，由于引物退火的不*、PCR扩增中可能引入新的突变点等原因，可能降低实验成功率。本公司曾经使用本试剂盒，成功进行了1.5 kb DN段的多位点基因突变实验。本试剂盒中的Anchor F1和Anchor R1引物可供克隆于pUC系列载体或pBluescript系列载体中的DN段的多位点基因突变实验，使用方便。使用试剂盒中的Control质粒及各种Control实验用引物可进行Control实验。
RNA提取法：试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
实验步骤：
1、RNA的提取;
2、反转录合成cDNA;
3、PCR扩增;
4、产物的电泳和结果的测定。
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在zui条件下进行。
碱变性提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会*分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
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