葡萄糖氧化酶是一种二聚体蛋白，可催化β-D-葡萄糖氧化为过氧化氢和D-葡萄糖基1,5-内酯，后者水解为葡萄糖酸。它被广泛用于测定体液中的葡萄糖以及从饮料，食品和其他农产品中去除残留的葡萄糖和氧气。此外，葡萄糖氧化酶通常用于生物传感器中以检测葡萄糖。Amplite™葡萄糖氧化酶测定试剂盒提供了一种快速灵敏的方法来测定溶液中的葡萄糖氧化酶。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松实现自动化。该试剂盒使用我们的Amplite™Red底物，可以使用酶标仪在570 nm处进行监测。

协议摘要

1. 准备葡萄糖氧化酶标准品或测试样品（50 µL）

2. 添加工作溶液（50 µL）

3. 在37°C下孵育10-30分钟

4. 监测OD = 570 nm处的吸光度

重要说明
在开始实验之前，将所有套件组件解冻至室温。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. Amplite™Red储备液（250X）：
将100 µL DMSO（组分E）添加到Amplite™Red（组分A）小瓶中。注意：Amplite™Red在存在硫醇（如二硫苏糖醇（DTT））的情况下不稳定。反应中DTT的终浓度应不高于10 µM。Amplite™Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH 7 – 8下进行。建议使用提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

2. HRP储备溶液（50X）：
将1毫升测定缓冲液（组分B）添加到辣根过氧化物酶（组分C）小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶原液（100 U / mL）：
将1 mL测定缓冲液（组分B）添加到小瓶葡萄糖氧化酶（组分D）中。

4.葡萄糖储备溶液（10X）：
将5 mL测定缓冲液（组分B）添加到葡萄糖小瓶（组分F）中。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

通过将2 µL的100 U / mL葡萄糖氧化酶原液稀释到200 µL的测定缓冲液（组分B）中以制备1000 mU / mL的葡萄糖氧化酶标准液，从而制备葡萄糖氧化酶标准液。然后xianjin行1：100连续稀释，然后再进行1：2连续稀释，以获得从10 mU / mL到0.156 mU / mL（GOS1- GOS7）的系列稀释葡萄糖氧化酶标准液。

准备工作溶液

将20 µL的Amplite™Red储备液（250X），100 µL的HRP储备液（50X）和500 µL的葡萄糖储备液（10X）加入4.3 mL的测定缓冲液（组分B）中，制成5 mL的工作溶液。

程序

表1.  在透明底部96孔微孔板中葡萄糖氧化酶标准品和测试样品的布局。GOS =葡萄糖氧化酶标准品（GOS1- GOS7，0.156至10 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2. 每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和2中提供的布局，准备葡萄糖氧化酶标准品（GOS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
   

2. 在每个孔中添加50 µL工作溶液到葡萄糖氧化酶标准液，空白对照和测试样品中，使总测定体积为100 µL /孔。对于384孔板，将25 µL GO工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。
   

3. 避光保存，在37°C下将反应孵育10至30分钟。
   

4. 使用吸光度板读数器在OD = 570 nm处监控吸光度的增加。

   11300	Amplite™荧光法葡萄糖氧化酶检测试剂盒 *红色荧光*	Amplite™ Fluorimetric Glucose Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence*	1 kit
   11301	Amplite™荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 *红色荧光*	Amplite™ Fluorimetric Myeloperoxidase Assay Kit *Red Fluorescence*	1 kit
   11302	Amplite™荧光法guansuan氧化酶检测试剂盒 *红色荧光*	Amplite™ Fluorimetric Glutamate Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence*	1 kit