动物源性食品中磺胺类药物残留量测定前的处理方法

　　磺胺类药物的危害及检测目的
 

　　磺胺类药物是指在结构上具有对氨基苯磺酰胺的一类化合物的总称，主要适用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学广谱抗菌药，种类繁多，应用广泛。磺胺类药物是应用较早的一类人工合成抗菌药，也是食品安全国家标准食品中兽药较大残留*(GB31650-2019)中规定允许使用的一类药物。但是允许使用不代表滥用，任何药物的不当使用都可能导致动物可食部分药物富集，磺胺类药物的广泛使用同样带来了这个问题。磺胺类药物残留会对人体产生泌尿系统损害及肝损害、造血系统损害、过敏、细菌耐药性等危害，对人体健康造成威胁。
 

　　本文阐述了如何将磺胺类药物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据国标GB/T21316-2007，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。
 

　　检测项目：磺胺类药物
 

　　应用范围：食品/动物源性食品/肝、肾、肌肉、水产品和牛奶等
 

　　方法原理：试样中加入C18填料后研磨均匀，用乙腈-水在微波辐照辅助下进行提取，乙腈饱和正己烷液液分配净化。液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。
 

　　前处理仪器：高速组织捣碎机；均质器；旋转蒸发器；氮吹仪；涡旋混匀器；分析天平：感量0.1mg和0.01g；真空泵；移液器1mL，,2mL；棕色鸡心瓶150mL；样品瓶2mL，带聚四氟乙烯旋盖；大号玻璃研钵；pH计，测量精度±0.2；离心机；棕色分液漏斗100mL；具螺旋盖聚四氟乙烯离心管50mL；超纯水仪；微波炉，家用，带有光波模式，功率700W；超声波发生器。
 

　　检测仪器：LC-MS/MS+ESI源
 

　　试样制备
 

　　1、肌肉、内脏、鱼和虾
 

　　从原始样品中取出代表性样品，经高速组织捣碎机均匀捣碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，分别装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于-20℃保存。
 

　　2、肠衣
 

　　从原始样品中取出代表性样品，用剪刀剪成4mm2的碎片，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，分别装入洁净容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于-20℃保存。
 

　　3、牛奶
 

　　从原始样品中取出代表性样品，用组织捣碎机充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于4℃避光保存。
 

　　前处理方法
 

　　1、提取
 

　　肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣
 

　　称取2g(精确至0.01g)试样置于玻璃研钵中，再称取约6g(精确至0.01g)C18填料(40μm)加至试样上用玻璃杵轻轻研磨，使样品与填料混合均匀(色泽均一，状态分散)，装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯离心管中，加入25mL乙腈-水(100:3V/V)溶液，旋涡振荡1min，放入家用微波炉中在光波模式下微波辐照30s，3000r/min离心5min，将乙腈层移入100mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入25mL乙腈摇匀，微波辅助提取30s，3000r/min离心5min，合并乙腈提取液，待净化。
 

　　牛奶
 

　　取2g(精确至0.01g)牛奶，置于玻璃研钵中，加入6g(精确至0.01g)硅藻土，另加入6g(精确至0.01g)C18填料，用玻璃杵轻轻研磨30s，使样品与填料混合均匀(色泽均一，状态分散)，装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯试管中，加入25mL乙腈-水(100:3V/V)溶液，旋涡振荡1min，放入家用微波炉中在光波模式下微波辐照30s，于3000r/min离心5min，将乙腈层移入100mL棕色分液漏斗中。离心后的沉淀物再加入25mL乙腈摇匀，微波辅助提取30s，于3000r/min离心5min，合并乙腈提取液，待净化。
 

　　2、净化
 

　　提取液中加入25mL乙腈饱和正己烷溶液，振摇5min，将底层乙腈溶液移入150mL棕色鸡心瓶中，加入10mL正丙醇，用旋转蒸发仪于45℃水浴中减压蒸发至近干，氮气流吹干。准确加入1mL乙腈-水(1:1V/V)溶液，超声30s溶解残渣，将溶解液移入10mL棕色离心管中，加0.5mL乙腈饱和正己烷，涡旋振荡2min，于3000r/min离心5min，弃去正己烷溶液，取底层乙腈-水溶液过0.22μm微孔滤膜，供高效液相色谱-质谱/质谱测定。
 

　　注意事项
 

　　1、因为磺胺类药物在光照下容易分解，其标准储备溶液需要避光存放，使用棕色试剂瓶保存。浓度为0.1mg/mL的标准储备液可在-20℃避光存放12个月。
 

　　2、该国标方法采用二次提取沉淀物的方式提高回收率。
 

　　3、提取液减压旋转蒸发时控制好温度和转速，防止爆沸，随时观察，至近干时及时停止取出鸡心瓶。
 

　　4、由于该国标方法没有使用相对应的同位素内标来校正回收率，建议使用相应的空白样品基质提取液配制标准曲线。