鸡新城疫病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书
【产品名称】
通用名：鸡新城疫病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Newcastle Disease Virus （ELISA）
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【预期用途】 新城疫又名伪鸡瘟或亚洲鸡瘟，是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的禽类的一种急性高度接触性传染病，以呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、粘膜出血为特征。
本试剂用于检测禽类血清中新城疫病毒抗体，可用于免疫效果评价、辅助诊断等。
【原 理】
本试剂盒系由预包被新城疫病毒抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测鸡血清或血浆中新城疫病毒抗体。实验时，在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有新城疫病毒的抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有新城疫病毒抗体。
【试剂盒组成】
序号 名称 规格（96T×1） 规格（96T×2）
1. 酶标板 96T×1 96T×2
2. 酶标记物 (红盖) 11ml×1 11ml×2
3. 样品稀释液 (黄盖) 50ml×1 50ml×1
4. 20X浓缩洗涤液 40ml×1 40ml×1
5. 底物液A (白盖) 6ml×1 11ml×1
6. 底物液B (黑盖) 6ml×1 11ml×1
7. 终止液 (黄盖) 6ml×1 11ml×1
8. 阳性对照 (红盖) 1.0 ml×1 1.5 ml×1
9. 阴性对照 (绿盖) 1.0 ml×1 1.5 ml×1
10. 盖板膜 1张 2张
11. 自封袋 1个 1个
12. 说明书 1份 1份
【储存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期为12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，*需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如2μl血清加入198μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl；阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。
6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照≤0.20，阳性对照≥0.6。
【检验结果的解释】
1.C.O（临界值）=0.13+阴性对照孔均值（阴性对照孔均值低于0.07时以0.07计算）；
2.样品A值≥C.O为阳性；样品A值＜C.O为阴性。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测鸡血清或血浆中新城疫病毒IgG抗体，根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以*溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
