细菌活性化蛋白制备裂解液ZIKER
英文名:Bacterial Activity-Keeping Lysis Buffer
相关类别:蛋白裂解试剂与试剂盒
储存:常温下运输,收到后,将溶液A在4℃的冰箱冷藏室中保存;溶液B和固体C在-20℃环境中保存,保质期一年。
细菌活性化蛋白制备裂解液ZIKER产品简介
一种比较温和裂解细菌的方式,采用特殊的酶体系和温和去污剂使样品快速充分破裂,从而释放蛋白质,内含作用强烈的蛋白酶抑制剂,从而保证了蛋白的完整和zui大限度保持细菌内蛋白的活性。合适用于细菌天然总蛋白,和重组的可溶解性蛋白质的提取,提取的可溶性蛋白与适量的结合液混合后,可以直接用GST标签的重组蛋白质的提取。稀释的本提取液也可以用于包含体的洗涤,提取的蛋白质可以用于SDS-PAGE、1D、2D电泳、Western Blot、免疫共沉淀和酶活性分析等后续研究。每次可以处理20mg湿重的菌体。
操作步骤
1. 将固体 C 全部溶解在溶液 A 中。
2. 将过夜培养的细菌培养物大约 1.5 mL 8000 rpm(5700 g)离心 1 min。
3. 按照每 20mg 湿重加混合后的溶液 A1 mL 和溶液 B 10 μL。
4. 在涡悬震荡器上震荡 1 min,让菌体充分悬浮。.
5. 37℃温育 1 hour,直到溶液变澄清为止。
6. 8000 rpm 离心 5 min,转移上清到一个新的离心管中,作为可溶性蛋白质部分。
7. 沉淀加入 5 倍稀释的混合后的溶液 A1 mL 和溶液 B 10 μL,在涡悬震荡器上震荡 1 min,静置 30 min,中间偶尔颠倒混匀 2-3 次。再 8000 rpm 离心 5 min,去上清。
8. 重复7步骤1次。再用灭菌水洗涤包涵体沉淀,离心收集包涵体。
注意事项
1. 溶液A在4℃的冰箱冷藏室中保存,加入固体C后也应该在4℃的冰箱冷藏室中保存,尽量在一个月内使用完毕。
2. 充分裂解后溶液中溶液是很透明,而且没有粘稠度。
3. 电泳和Western Blot 时有分子量为14400 Da(等电点9.38)和31000 Da两个额外条带,但是不影响使用。
4. 使用后,请旋紧瓶盖,防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。
5. 本试剂只能够用于体外实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果概不承担责任。
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