细胞名称:AtT-20 小鼠垂体瘤细胞
组织来源:垂体;瘤
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS
形 态:小的圆形细胞
背 景:AtT-20细胞生长时不贴壁,而结成活细胞团。能抗脊髓灰质炎病毒。检测发现肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。
AtT-20(小鼠垂体瘤细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
formazan结晶的生成量仅与活AtT-20(小鼠垂体瘤细胞)数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值,以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光,用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好。
1.接种:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个接种到96孔板,每孔体积200ul.
2.AtT-20(小鼠垂体瘤细胞)培养:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
3.呈色:培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.
继续孵育4小时,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO,振荡10分钟,使结晶物充分融解。
4.比色:选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制AtT-20(小鼠垂体瘤细胞)生长曲线。
KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)
KU812人外周血嗜碱性白血病细胞
KURAMOCHI人卵巢癌细胞
kyse-140人食管癌细胞
Kyse450人食管癌细胞
KYSE-510人食管癌细胞
L78人肺腺鳞癌细胞
LAX人肺腺癌
LECPα-1人肺癌细胞
Li-7人肝癌细胞
lncap人前列腺癌细胞
LNCaP clone FGC人前列腺癌细胞
LoVo人结肠癌细胞