艾本德单道移液器
量程的调节
在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的zui高精确度。
在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。
枪头（吸液嘴）的装配
在将枪头（pipette tips）套上移液枪时，很多人会使劲地在枪头盒子上敲几下，这时错误的做法，因为这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。如果是多道（如8道或12道）移液枪，则可以将移液枪的*道对准*个枪头，然后倾斜地插入，往前后方向摇动即可卡紧。枪头卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。
移液的方法
移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度。吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下2－3毫米。在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴（尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时）。这时可以采取两种移液方法。
一是前进移液法。用大拇指将按钮按下至*停点，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至*停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。zui后松开按钮。
二是反向移液法。此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体，其原理就是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按至*停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于*停点（千万别再往下按），取下有残留液体的枪头，弃之。
移液器的正确放置
使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。
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移液器（移液枪）维护保养时的注意事项
如不使用，要把移液枪的量程调至zui大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。
定期清洗移液枪，可以用肥皂水或60 ％的异丙醇，再用蒸馏水清洗，自然晾干。
高温消毒之前，要确保移液器能适应高温。
校准是可以在20-25度环境中，通过重复几次秤量蒸馏水的方法来进行。
使用时要检查是否有漏液现象。方法时吸取液体后悬空垂直放置几秒中，看看液面是否下降。如果漏液，原因大致有一下几方面：
1、枪头是否匹配；
2、弹簧活塞是否正常；
3、如果是易挥发的液体（许多有机溶剂都如此），则可能是饱和蒸汽压的问题。可以先吸放几次液体，然后再移液。
艾本德移液器的校对方法
1、准备超纯水、万分之一天平（如果校正0.5~2.5ul量程的，至少要十万分之一的天平）、温湿度计、恒温室，还需准备一个小口容器，防止水分挥发。
2、按移液器总量程的*、50%、10%分别进行第三和第四步。
3、吸头要反复吸取超纯水三次后，吸取固定容积的超纯水，推入放置在天平上的小口容器中，待数据稳定读取天平数值，同时记录温度。重复10次。
4、将测量的数据用iso8655中的计算公式计算获得对应温度下的体积，取平均值。
5、根据三个测量点的偏差，用移液器的校正扳手通过移液器的校正窗进行调整。
6、重复3、4步，直至偏差在ISO8655的要求内为止。
ISO 8655-1-2002活塞式容量测量仪器.第1部分:术语、一般要求和用户使用建议
ISO 8655-2-2002 活塞式容量测量仪器.第2部分:活塞式吸量管
ISO 8655-6-2002 活塞式容量测量仪器.第6部分:确定测量误差的重量分析法
三、艾本德移液器校准方法及步骤
操作环境：温度应控制在15-30℃，恒定在±0.5℃，相对湿度50%-80%，要保持较高的空气湿度以减少水分蒸发对结果造成的影响。建议使用防蒸发装置。测试应在独立无通风的房间内进行，并配备温度和湿度显示。
所需设备：
1、分析天平一台。确保室内空气流动平缓，应避免天平正对空调出风口。
根据所测试的移液器的容量来选择适合的天平：
移液器容量范围 | 天平可读性 | 天平的重复性和线性 | 测量不准确度 |
1μl~10μl | 0.001mg | 0.002mg | ≤0.002mg |
10~100μl | 0.01mg | 0.02mg | ≤0.02mg |
>100μl | 0.1mg | 0.2mg | ≤0.2mg |
2、纯水、三蒸水或去离子水，需达到ISO 3696三级水的标准。
3、独立工作间，配备防震、防尘、远离热源、无阳光直射的操作台。
4、温度计、湿度计。
校准操作：
为确保校准的准确性，采用三点移液十次，具体步骤如下：
1、同温处理，将移液器、吸头、天平、测试用水、操作台等校准用具放置在同一工作间内，至少四小时。
2、在正式操作前，先预洗吸头，吸排测试用水5次。
3、用zui大体积、50%zui大体积和zui小体积（或10%zui大体积），各移液10次，记录每次移液的质量。
4、计算每组数据的平均值，代入计算公式，计算出不准确度与不精确度。
5、对比可允许的zui大误差限度，根据实际需要确定进行调整。
附：相关计算公式
质量体积转换
公式1：V=(w+e)×Z
式中： V=体积（μl）
w=质量（mg）
e=蒸发损失（mg）
Z转换因子
以上公式参考ISO 8655标准。
蒸发损失对测量小体积液体影响较大，因此应将蒸发损失计算在内。
方法：在称过重的容器中注入定量清水，按下秒表观察30秒，读出损失量，然后算出每秒的损失量。（若30s内质量损失3mg，则损失量为3mg÷30s=0.1mg/s）。
记录移液时间，将移液时间乘以每秒损失量，算出实际蒸发损失量，代入上述公式计算实际体积。若使用防蒸发装置，通常可以忽略蒸发损失量。不同温度、压力下水的质量和体积不同，具体转换因子Z值请查看附录1。
公式2：V20=m×K(t)
式中： V20=标准温度20℃下实际体积（μl）
m=质量（mg）
K(t)值
以上公式参考JJG 646-2006移液器检定规程。
根据天平测试蒸馏水的质量，以及检测时温度所对应的K(t)值，即可计算出标准温度下蒸馏水的实际体积。具体K(t)值请查看附表2。
计算式时，请根据实际需要，选择公式进行计算。
不准确度（系统误差）
不准确度是指实际移取体积和显示体积的差异。
A=- V0
式中： A=不准确度
=平均值
V0 =标称容量
A%=*×A/V0
不精确度（随机误差）
不精确度指每次实际移取体积与实际体积平均值的差异，其变化是不可预计的测量误差的一部分。它可以表示为标准差S或变异系数CV：
式中：
S =标准偏差 |
CV=*×S／
附表1：转换因子Z(μl/mg)数值表（无菌水）
温度 | 气压（KPa） 1KPa=10hPa | ||||||
（℃） | 80 | 85 | 90 | 95 | 100 | 101.3 | 105 |
15.00 | 1.0017 | 1.0018 | 1.0019 | 1.0019 | 1.0020 | 1.0020 | 1.0020 |
15.50 | 1.0018 | 1.0019 | 1.0019 | 1.0020 | 1.0020 | 1.0020 | 1.0021 |
16.00 | 1.0019 | 1.0020 | 1.0020 | 1.0021 | 1.0021 | 1.0021 | 1.0022 |
16.50 | 1.0020 | 1.0020 | 1.0021 | 1.0021 | 1.0022 | 1.0022 | 1.0022 |
17.00 | 1.0021 | 1.0021 | 1.0022 | 1.0022 | 1.0023 | 1.0023 | 1.0023 |
17.50 | 1.0022 | 1.0022 | 1.0023 | 1.0023 | 1.0024 | 1.0024 | 1.0024 |
18.00 | 1.0022 | 1.0023 | 1.0023 | 1.0024 | 1.0025 | 1.0025 | 1.0025 |
18.50 | 1.0023 | 1.0024 | 1.0024 | 1.0025 | 1.0025 | 1.0026 | 1.0026 |
19.00 | 1.0024 | 1.0025 | 1.0025 | 1.0026 | 1.0026 | 1.0027 | 1.0027 |
19.50 | 1.0025 | 1.0026 | 1.0026 | 1.0027 | 1.0027 | 1.0028 | 1.0028 |
20.00 | 1.0026 | 1.0027 | 1.0027 | 1.0028 | 1.0028 | 1.0029 | 1.0029 |
20.50 | 1.0027 | 1.0028 | 1.0028 | 1.0029 | 1.0029 | 1.0030 | 1.0030 |
21.00 | 1.0028 | 1.0029 | 1.0029 | 1.0030 | 1.0031 | 1.0031 | 1.0031 |
21.50 | 1.0030 | 1.0030 | 1.0031 | 1.0031 | 1.0032 | 1.0032 | 1.0032 |
22.00 | 1.0031 | 1.0031 | 1.0032 | 1.0032 | 1.0033 | 1.0033 | 1.0033 |
22.50 | 1.0032 | 1.0032 | 1.0033 | 1.0033 | 1.0034 | 1.0034 | 1.0034 |
23.00 | 1.0033 | 1.0033 | 1.0034 | 1.0034 | 1.0035 | 1.0035 | 1.0036 |
23.50 | 1.0034 | 1.0035 | 1.0035 | 1.0036 | 1.0036 | 1.0036 | 1.0037 |
24.00 | 1.0035 | 1.0036 | 1.0036 | 1.0037 | 1.0037 | 1.0038 | 1.0038 |
24.50 | 1.0037 | 1.0037 | 1.0038 | 1.0038 | 1.0039 | 1.0039 | 1.0039 |
25.00 | 1.0038 | 1.0038 | 1.0039 | 1.0039 | 1.0040 | 1.0040 | 1.0040 |
25.50 | 1.0039 | 1.0040 | 1.0040 | 1.0041 | 1.0041 | 1.0041 | 1.0042 |
26.00 | 1.0040 | 1.0041 | 1.0041 | 1.0042 | 1.0042 | 1.0043 | 1.0043 |
26.50 | 1.0042 | 1.0042 | 1.0043 | 1.0043 | 1.0044 | 1.0044 | 1.0044 |
27.00 | 1.0043 | 1.0044 | 1.0044 | 1.0045 | 1.0045 | 1.0045 | 1.0046 |
27.50 | 1.0045 | 1.0045 | 1.0046 | 1.0046 | 1.0047 | 1.0047 | 1.0047 |
28.00 | 1.0046 | 1.0046 | 1.0047 | 1.0047 | 1.0048 | 1.0048 | 1.0048 |
28.50 | 1.0047 | 1.0048 | 1.0048 | 1.0049 | 1.0049 | 1.0050 | 1.0050 |
29.00 | 1.0049 | 1.0049 | 1.0050 | 1.0050 | 1.0051 | 1.0051 | 1.0051 |
29.50 | 1.0050 | 1.0051 | 1.0051 | 1.0052 | 1.0052 | 1.0052 | 1.0053 |
30.00 | 1.0052 | 1.0052 | 1.0053 | 1.0053 | 1.0054 | 1.0054 | 1.0054 |
附表2：K（t）值表
（β=0.00045/℃）
水温 | K(t) | 水温 | K(t) | 水温 | K(t) |
℃ | cm3/g | ℃ | cm3/g | ℃ | cm3/g |
15.0 | 1.004213 | 18.4 | 1.003261 | 21.8 | 1.002436 |
15.1 | 1.004183 | 18.5 | 1.003235 | 21.9 | 1.002414 |
15.2 | 1.004153 | 18.6 | 1.003209 | 22.0 | 1.002391 |
15.3 | 1.004123 | 18.7 | 1.003184 | 22.1 | 1.002369 |
15.4 | 1.004094 | 18.8 | 1.003158 | 22.2 | 1.002347 |
15.5 | 1.004064 | 18.9 | 1.003132 | 22.3 | 1.002325 |
15.6 | 1.004035 | 19.0 | 1.003107 | 22.4 | 1.002303 |
15.7 | 1.004006 | 19.1 | 1.003082 | 22.5 | 1.002281 |
15.8 | 1.003977 | 19.2 | 1.003056 | 22.6 | 1.002259 |
15.9 | 1.003948 | 19.3 | 1.003031 | 22.7 | 1.002238 |
16.0 | 1.003919 | 19.4 | 1.003006 | 22.8 | 1.002216 |
16.1 | 1.003890 | 19.5 | 1.002981 | 22.9 | 1.002195 |
16.2 | 1.003862 | 19.6 | 1.002956 | 23.0 | 1.002173 |
16.3 | 1.003833 | 19.7 | 1.002931 | 23.1 | 1.002152 |
16.4 | 1.003805 | 19.8 | 1.002907 | 23.2 | 1.002131 |
16.5 | 1.003777 | 19.9 | 1.002882 | 23.3 | 1.002110 |
16.6 | 1.003749 | 20.0 | 1.002858 | 23.4 | 1.002089 |
16.7 | 1.003721 | 20.1 | 1.002834 | 23.5 | 1.002068 |
16.8 | 1.003693 | 20.2 | 1.002809 | 23.6 | 1.002047 |
16.9 | 1.003665 | 20.3 | 1.002785 | 23.7 | 1.002026 |
17.0 | 1.003637 | 20.4 | 1.002761 | 23.8 | 1.002006 |
17.1 | 1.003610 | 20.5 | 1.002737 | 23.9 | 1.001985 |
17.2 | 1.003582 | 20.6 | 1.002714 | 24.0 | 1.001965 |
17.3 | 1.003555 | 20.7 | 1.002690 | 24.1 | 1.001945 |
17.4 | 1.003528 | 20.8 | 1.002666 | 24.2 | 1.001924 |
17.5 | 1.003501 | 20.9 | 1.002643 | 24.3 | 1.001904 |
17.6 | 1.003474 | 21.0 | 1.002619 | 24.4 | 1.001884 |
17.7 | 1.003447 | 21.1 | 1.002596 | 24.5 | 1.001864 |
17.8 | 1.003420 | 21.2 | 1.002573 | 24.6 | 1.001845 |
17.9 | 1.003393 | 21.3 | 1.002550 | 24.7 | 1.001825 |
18.0 | 1.003367 | 21.4 | 1.002527 | 24.8 | 1.001805 |
18.1 | 1.003340 | 21.5 | 1.002504 | 24.9 | 1.001786 |
18.2 | 1.003314 | 21.6 | 1.002481 | 25.0 | 1.001766 |
18.3 | 1.003288 | 21.7 | 1.002459 |
|
|
附表3：移液器容量允许误差和测量重复性简表
JJG-646 | ISO 8655 | ||||
检定点 | 系统误差 | 随机误差 | 标称容量 | 系统误差 | 随机误差 |
μl | ±（%） | ≦（%） | μl | ±（%） | ≦（%） |
0.1 | 20.0 | 10.0 |
|
|
|
0.2 | 20.0 | 10.0 |
|
|
|
0.5 | 20.0 | 10.0 |
|
|
|
1 | 12.0 | 6.0 | 1 | 5.0 | 5.0 |
2 | 12.0 | 6.0 | 2 | 4.0 | 2.0 |
5 | 8.0 | 4.0 | 5 | 2.5 | 1.5 |
10 | 8.0 | 4.0 | 10 | 1.2 | 0.8 |
20 | 4.0 | 2.0 | 20 | 1.0 | 0.5 |
25 | 4.0 | 2.0 |
|
|
|
40 | 3.0 | 1.5 |
|
|
|
50 | 3.0 | 1.5 | 50 | 1.0 | 0.4 |
100 | 2.0 | 1.0 | 100 | 0.8 | 0.3 |
125 | 2.0 | 1.0 |
|
|
|
150 | 2.0 | 1.0 |
|
|
|
200 | 1.5 | 1.0 | 200 | 0.8 | 0.3 |
250 | 1.5 | 1.0 |
|
|
|
300 | 1.5 | 1.0 |
|
|
|
500 | 1.0 | 0.5 | 500 | 0.8 | 0.3 |
1000 | 1.0 | 0.5 | 1000 | 0.8 | 0.3 |
1250 | 1.0 | 0.5 |
|
|
|
|
|
| 2000 | 0.8 | 0.3 |
2500 | 0.5 | 0.2 |
|
|
|
5000 | 0.6 | 0.2 | 5000 | 0.8 | 0.3 |
10000 | 0.6 | 0.2 | 10000 | 0.6 | 0.3 |
注：①标称容量为制造商在移液器上标注的可使用的zui大容量，如量程范围是50-1200μl，其标称容量为1200μl。
②JJG-646中，同一个检定点在不同的量程范围，容量允差、重复性要求*，即无论是1-10μl的移液器还是10-100μl的移液器，10μl这一检定点容量允差都为8%，重复性都为4%。
③ISO 8655中，所有有效量程点的容量允差、重复性都与标称容量的*，即10-100μl的移液器，10μl、20μl、50μl、100μl，其容量允差要求都为0.8%，重复性都为0.3%。
四、维护保养
1 清洁和消毒
为确保移液器的准确度和精确度，应根据具体使用情况进行定期保养。尤其在移取腐蚀性溶剂后，应该对移液器进行清洁。通过简单的清洁和保养，可适当地延长移液器的使用寿命。
注意：在清洁或消毒前，请务必将电池取出。
① 外部清洗
方法：根据使用情况，可以用沾有70%乙醇或60％异丙醇的湿棉布拭擦移液器表面，去除外部污垢，再用双蒸水拭擦一遍，然后晾干。
每天开始工作前，检查移液器外表是否有灰尘或污垢，尤其是吸头连杆部分。
② 内部清洗
清洁步骤：
1、按照步骤拆卸需要清洁的部件。
2、外套柄、吸头连杆用沾有70%乙醇或60％异丙醇的湿棉布拭擦，再用双蒸水淋洗，然后晾干。
3、一般情况，O型圈、活塞无需清洁。如沾有固体颗状物，请用干净的干棉布轻轻拭去即可。
4、给O型圈、活塞上润滑脂，只需涂上薄薄一层即可。
5、按步骤组装好移液器。
③ 消毒
移液器清洁干净后，在121℃,1bar下，消毒20分钟。消毒后在室温下冷却至少2个小时后方可使用。部分手动移液器可整支消毒，电动移液器只可以下端消毒，请根据产品的具体情况进行消毒。
整支在紫外线下进行消毒灭菌，无需拆卸。
2 日常维护
针对不同性质的液体，有不同的清洗和保养方法，见下表：
处理液体 | 预防方法 | 清洗和保养方法 |
水溶液和缓冲液 |
| 拆卸移液器下端，用双蒸水冲洗受污染的部件，在60℃以下干燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂 |
无机酸或碱 | =使用带有滤芯的吸头 | 移液结束后，将移液器下端拆下，并放在通风处。必要时可用双蒸水冲洗受污染的部件，在60℃以下干燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂 |
传染性 | =使用带有滤芯的吸头 | 将移液器下端拆下，放在实验室常规的消毒剂中浸泡30分钟，随后用双蒸水清洗，对受污染的部件进行121℃、1bar、20分钟高压灭菌 |
细胞培 | =使用带有滤芯的吸头 | 将移液器下端拆下，放在实验室常规的消毒剂中浸泡30分钟，随后用双蒸水清洗，对受污染的部件进行121℃、1bar、20分钟高压灭菌 |
有机溶剂 | =快速移液 | 移液结束后，将移液器下端拆下，并放在通风处。必要时可用双蒸水冲洗受污染的部件，在60℃以下干燥或者自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂 |
放射性 | =使用带有滤芯的吸头 | 将移液器下端拆下，将受污染部件放在复合溶液或的清洁溶液中浸泡30分钟后，用双蒸水清洗，在60℃下烘干或自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂 |
核酸或蛋白质溶液 | =使用带有滤芯的吸头 | 核酸：在氨基乙酸或盐酸缓冲液(pH2.0)中煮沸10分钟，用双蒸水清洗干净，在60℃下烘干或自然晾干，并给活塞涂抹少量润滑脂 |
故障排除
现象 | 原因 | 解决方法 |
活塞运动异常 | =活塞安装过紧 | ——拆开下端，重新组装 |
移液体积不准确 | =吸头安装不当 | ——重新安装吸头 |
吸头内有残液 | =选用了带附加液的模式 | ——按启动键排空吸头 |
吸头内有残液 | =吸头吸附性高 | ——更换低吸附吸头 |
操作时有杂音 | =活塞润滑不充分 | ——给活塞上润滑脂 |
特殊液体分液 | =校准不当，高粘度的液体需要重新校准 | ——用问题液体重新校准 |
吸头脱落或 | =劣质吸头 | ——使用优质吸头 |
3 储放
日常储放：使用完毕，请将移液器竖直挂在移液枪架上。当移液器吸头内有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞。
当产品*不使用时，请将电池取出，然后将清洁消毒后的移液器在干燥、洁净、常温下储存。避免放置在温度变化大、湿度高、灰尘量大的环境中。
4 注意事项
· 在移液器的化学腐蚀力限度以内使用
· 请勿移取高度易燃的液体
· 若移取液体与移液器、吸头温度不*时，移取结果可能会出现偏差，因此三者应保持温度*
· 请勿在有爆炸危险的气体范围中使用本产品
· 请勿蛮力使用、拆卸移液器
· 若移液器无法正常运作，应立即停止操作，查阅故障分析章节
· 操作温度应保持在15℃到40℃之间，相对湿度应在80%以下
· 请妥善放置移液器、充电器等物件，避免意外跌落造成损坏
