CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针运输与保存方法
荧光标记细胞已被广泛证实可有效确定总细胞的数量和一个样本中存在多少活细胞。流式细胞术结合荧光染色法是分析非均质细胞种群的有力工具。非荧光性的FDA和它的衍生物分子进入细胞后被胞内无特异性的酯酶所水解产生荧光。这些荧光产物只能积聚在具有完整细胞膜的细胞中。因此，死细胞无完整细胞膜不能被染色。FDA及其类似物（如CDCFDA）精细的跨膜动力学以及胞内水解特点与细胞功能相关，因此FDA标记可以通过荧光显微镜或者流式细胞仪来检测细胞。然而，因为CFSE和它的荧光类似物与GFP或者FITC具有相同的激发光谱，因此CFSE和它的荧光类似物不能用于GFP转染细胞或者FITC标记抗体的应用中。VFSE染料与CFSE功能相似，因为它们都包含酯酶切割和胺反应的SE基团。VFSE染料能用于多色反应，因为VFSE与CFSE和它的荧光类似物具有不一样的激发和发射光谱， 因此可以用于GFP转染细胞或者FITC标记抗体的应用中。
常用名 | CDCFDA | ||
中文名称 | 活细胞荧光示踪探针 | ||
英文名称 | 5-(and-6)-Carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester | ||
CAS# | / | 分子式 | C29H19 |
分子量 | 626.35 | 纯度 | ≥95%（HPLC） |
Ex(nm) | 504 | Em(nm) | 529 |
结构式 |
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CFDA, SE 细胞增殖示踪荧光探针运输与保存方法
常温运输，-20℃干燥避光保存，保质期24个月。避免反复多次冻融。
使用方法
1.保存液配制（5mM）
按需配制，如取DMSO 360μL，溶解1mg CDCFDA，超音波溶解，得到5mM 保存液；将其按40μL体积分装于避光的无菌冻存管中，-20℃可保存2个月。
注意：CDCFDA遇水容易分解，所以在配置时候要用无水DMSO，配置后计算用量尽快使用，多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有机溶剂，对于蛋白质会有损伤，所以在配置的时候DMSO用量越少越好；
2. 工作液配制
取5mM的CDCFDA稀释液1 ul，加入1ml 10％FCS 的PBS稀释。
3.染色
a.重悬细胞。用有5％FCS的PBS重悬细胞，细胞浓度一般为1x1x106/ml （体外实验）或1x1x107/ml（转染实验）。
b.染色。1ml DFSE工作液与1ml细胞悬液混合后37℃孵育5－10分钟。期间轻轻混匀两次（用手轻弹管壁，切忌吹打）。
c.终止染色。用*培养液洗涤3次并离心。一般在第2次洗涤后再孵育5分钟后进行第3次洗涤。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640（先加入1ml混匀 ，然后续加入7ml）, 轻轻混匀1min（用手轻弹，切忌吹打）,1 500 r/ min 离心5 min。
d.流式细胞仪在FL1通道检测。
