中文名称：pET-N-GST-PreScission质粒
英文名称：pET-N-GST-PreScission Plasmid
产品规格：1μg|100μg
发货周期：1～3天
产品货号：BJ-F0164713
生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。产品介绍：
pET-N-GST-PreScission是一种用于表达N端含有GST-tag的目的蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有PreScission酶切位点，可通过PreScission Protease切除N端的GST标签。本质粒为卡那抗性。 本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。 本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应的核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，因此在目的蛋白纯化后可以用PreScission Protease切除N端的GST标签。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。 通常可以采用如GoldBalb GST-tag Purification Resin和GST标签蛋白纯化试剂盒等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用GST抗体检测和少量地分离纯化目的蛋白。 使用说明： 1．使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。 2．100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。 3．pET-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。 |
使用方法：本产品仅用于科研
注意：标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子最好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一级容器)。
鼻拭子的采集：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签浸入第一步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中，弃去拭子尾部，拧紧螺旋盖。
直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上，连同一级容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二级容器)内，拧紧盖，在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个二级容器内。二级容器要承受不少于95 KPa的压力，内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二级容器摆放在专用运输箱内(或疫苗运输箱)，放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封，由专人(2人)运送，不得邮寄，最好使用专车。
采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在-70℃以下保存。无-70℃条件的，需在4℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳定，故长期保存最好在-70℃温度以下进行。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。
蛋白（A）荧光共振能量转移法（FRET）、（B）化学发光法（luminometry）、
（C）比色法（colorimetry）试剂专题
磷酸化酶活性定量试剂专题
ATP酶活性定量试剂专题
甲羟戊酸（MEVALONATE）通路分析试剂专题
L-半胱甲酯盐酸盐 L-Cysteine methyl ester 质量规格：>98%,BR RatP-SelectinELISAKit大鼠P选择素(P-Selectin/CD62P)elisa规格：96T/48T
甘甲酯盐酸盐 Glycine methyl ester 质量规格：>98%,BR HIS标记蛋白Ni-A树脂再生试剂盒20
L-谷二甲酯盐酸盐 L-Glutamic acid dimethyl ester 质量规格：0.98 MouseUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3elisa小鼠高敏三甲状腺原(u-T3)elisa规格：96T/48T
L-亮甲酯盐酸盐 L-Leucine methyl ester 质量规格：0.98 小鼠巨噬细胞炎性蛋白相关蛋白1(MRP1)elisa ，英文名： MRP1 ELISA Kit
L-苯丙甲酯盐酸盐 L-Phenylalanine methyl ester 质量规格：>99%,BR 人17羟皮质类(17-OHCS)ELISA检测试剂盒Human17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit 96T/48T
L-脯甲酯盐酸盐 L-Proline methyl ester 质量规格：>98.5%,BR 大鼠血管舒缓激肽(BK)试剂盒 Rat bradykinin,BK ELISA Kit
L-丝甲酯盐酸盐 L-Serine methyl ester 质量规格：>98%,BR 英文名称RatPCNAELISAKit大鼠增殖细胞抗原(PCNA)规格：96T/48T
L-色甲酯盐酸盐 L-Tryptophan methyl ester 质量规格：>98%,BR 高通量远红外细胞筛选技术试剂盒5
L-酪甲酯 L-Tyrosine methyl ester 质量规格：>98%,BR ELISAKitEL人优球蛋白规格：48T/96T
L-半胱乙酯盐酸盐 L-Cysteine ethyl ester 质量规格：0.98 小鼠巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa ，英文名： MIP-5 ELISA Kit
pET-N-GST-PreScission质粒-d7 Flutamide-d7 质量规格：美国进口 英文名称Ratai-thrombieceptorELISAKit大鼠抗受体(A)规格：96T/48T
4-过氧氢-d4 4-Hydroperoxy Cyclophosphamide-d4 质量规格：美国进口 英文名称Ratai-thrombieceptorELISAKit大鼠抗受体(A)规格：96T/48T
乳酸盐 Trimethoprim lactate salt 质量规格：美国进口 英文名称RatALDELISAKit大鼠固同(ALD)规格：96T/48T
西维来司 Sivelestat 质量规格：美国进口 英文名称RatALDELISAKit大鼠固同(ALD)规格：96T/48T
西维来司钠盐 Sivelestat salt 质量规格：美国进口 英文名称RatAmylinELISAKit大鼠胰淀素(Amylin)elisa规格：96T/48T
2-羟 2-Hydroxy Nevirapine 质量规格：美国进口 英文名称RatAmylinELISAKit大鼠胰淀素(Amylin)elisa规格：96T/48T
3-羟基 3-Hydroxy Nevirapine 质量规格：美国进口 英文名称RatANCAELISAKit大鼠抗嗜中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)规格：96T/48T
4-亚硝基磺胺甲恶唑 4-Nitroso Sulfamethoxazole 质量规格：美国进口 英文名称RatenedioneELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)规格：96T/48T
磺胺甲恶唑羟胺 Sulfamethoxazole Hydroxylamine 质量规格：美国进口 英文名称RatenedioneELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)规格：96T/48T
4-硝基磺胺甲恶唑 4-Nitro Sulfamethoxazole 质量规格：美国进口 英文名称RatAngiogeninELISAKit大鼠血管生长素(Angiogenin)规格：96T/48T
