投入接种液是为了保证有一定量的微生物降解水中的有机物，接种液的量以使5日耗氧0.1mg/L以下为佳。使用由金属蒸馏器制备的蒸馏水作为稀释水时，应注意检查其中的金属离子含量，以避免因此抑制微生物繁殖和代谢。为确保稀释水中溶解氧接近饱和，必要时可通入净化空气或纯氧，然后于在20oC培养箱中放置一定时间，使之与空气中氧分压达到平衡。稀释倍数的确定是以培养5日耗氧大于2mg/L，剩余溶解氧大于1mg/L为原则。稀释倍数过大或过小，都会导致检验失败。小型污水处理一体化设备小型污水处理一体化设备
而且由于BOD5分析周期较长，一旦出现类似情况，就无法以原样补测。初测某一工业废水的BOD5时，可以测定其CODCr，然后查阅参考已有的水质类似的废水的有关监测数据，初步确定待测水样BOD5/CODCr值，据此推算出BOD5的大致范围和确定稀释倍数。对含有抑制或杀灭好氧微生物代谢活动的物质的水样，
直接用通常方法测定BOD5的结果会偏离实际值，必须在测定前做相应的预处理，这些对BOD5测定有影响的物质和因素包括重金属及其他有毒的无机物或有机物、余氯等氧化性物质、pH值过高或过低等。BOD5的测定是一个生物化学耗氧过程，水样中的微生物以水中有机物为营养生长繁殖的同时，分解有机物并消耗了水中的溶解氧，因此水样中必须含有一定数量的对其中有机物有降解能力的微生物。
