ADP-核糖-pNP是用于评估聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)酶活性的比色底物。在405 nm处测定释放的对硝基benfen的吸光度,并使用校准曲线的斜率将吸光度转换为生成的产物的摩尔数。以ADP-核糖-pNP作为比色底物,确定PARP-1具有zui大的Km和Vmax值(分别为151 uM和1.30 nmolmin-1mg-1),然后是tankyrase-1(82 uM和18 pmolmin-1mg-)。 1)和VPARP(分别为46 uM和2 pmolmin-1mg-1)。此比色底物可用于确定PARP-1,tankyrase-1和VPARP的动力学参数,并筛选PARP-1,tankyrase-1和VPARP的小分子抑制剂。与标准的不连续PARP分析相比,基于ADP-核糖-pNP的连续分析具有明显的优势,
吸光度酶标仪 | |
吸光度 | 405纳米 |
推荐板 | 纯白色 |
以下建议的步骤可适用于测量PARP-1,tankyrase-1和VPARP活性及其抑制剂。对于每个测试,必须通过实验确定*条件。
储备溶液的制备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. ADP-核糖-pNP储备溶液:
在H 2 O中制成5-10 mM储备溶液。注意:储备溶液应立即使用。
准备工作溶液
ADP-核糖-pNP工作溶液:
用测定缓冲液(50mM Tris,10mM MgCl 2,pH 8.0)稀释储备液,制备0.25 mM测定溶液。
程序
将0.01 mL /孔的样品溶液添加到0.09 mL /孔的测定溶液中,以在96孔透明板上zui终体积为0.1 mL。
使用酶标仪在405 nm处监测板。
普通储备溶液的制备
表1.将特定质量的ADP-核糖-pNP重构为给定浓度所需的水量。请注意,该体积仅用于制备储备溶液。有关适当的实验/生理缓冲液,请参阅样本实验方案。
0.1毫克 | 0.5毫克 | 1毫克 | 5毫克 | 10毫克 | |
1毫米 | 138.051微升 | 690.255微升 | 1.381毫升 | 6.903毫升 | 13.805毫升 |
5毫米 | 27.61微升 | 138.051微升 | 276.102微升 | 1.381毫升 | 2.761毫升 |
10毫米 | 13.805微升 | 69.025微升 | 138.051微升 | 690.255微升 | 1.381毫升 |
糖度计算器
输入任何两个值(质量,体积,浓度)以计算第三个值。
11700 | PARP酶显色底物ADP-ribose-pNP | ADP-ribose-pNP | 1 mg |
11705 | 葡糖基转称酶与梭菌酶荧光底物UDP-Gic-FITC | Glucose-UDP-Fluorescein Conjugate | 100 ug |
11706 | 葡糖基转称酶与梭菌酶荧光底物UDP-Gic-PEG-FITC | Glucose-UDP-(PEG)6-Fluorescein Conjugate | 100 ug |
11950 | Amplite™比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 *黄色* | Amplite™ Colorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Yellow Color* | 1 kit |
11952 | Amplite™荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 *蓝色荧光* | Amplite™ Fluorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Blue Fluorescence* | 1 kit |
11953 | Amplite™荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 *绿色荧光* | Amplite™ Fluorimetric Alkaline Phosphatase Assay Kit *Green Fluorescence* | 1 kit |