名称 HELF细胞(人胚肺成纤维细胞)
种属 人
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 成纤维细胞样
生长培养基 DMEM(PM150210)+10% FBS(164210-500)+1% P/S(PB180120)
推荐传代比例 1:3-1:4
HELF细胞(人胚肺成纤维细胞)推荐换液频率 2~3次/周
冻存条件 冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度:液氮
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%温度:37℃
细胞冻存操作要点:
1、细胞冻存前12~24h,换新鲜培养基,使细胞一直处于对数生长期。
2、待细胞长至80%汇合时*消化,用新鲜培养基吹打后制成细胞悬液,1000rpm离心10min。悬浮细胞则直接离心。
3、弃上清,加入冻存液重悬细胞沉淀,调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL。将细胞悬液分至冻存管内,每管1~1.5mL,拧紧盖子。在管壁上做好标记,标明细胞名称、冻存日期等。
4、按下列顺序依次降温:室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存。也可使用程序降温盒更为方便,细胞冻存管放入程序降温盒内可直接放入-80℃过夜,再转至液氮罐内。注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于zui低刻度线;冻存5次后异丙醇需要跟换一次,以免影响冻存效果。
5、细胞冻存后应取出一管复苏,检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存,为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养,观察细胞生长情况,再继续冻存。
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