大鼠胎儿表皮组织提取物

大鼠胎儿表皮组织提取物【Embryo: Normal Rat Fetal Epidermal Derivatives】
表皮组织是由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。公司科技提供来自新鲜或冷冻大鼠胎儿表皮组织中高质量的总RNA，PCR准备的条cDNA链，蛋白质及其亚组分。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备大鼠胎儿表皮组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

培养步骤：

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

Human IL-22 (Interleukin 22) ELISA KitB细胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗体anti- OCT4 antibody血管内皮生长因子A(VEGFA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human IL-23 (Interleukin 23) ELISA Kit白细胞抗原B相关转录蛋白5抗体anti- Oct6-Specific antibody叉头框蛋白M1(FOXM1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human IFN-γ (Interferon Gamma) ELISA KitBTB/POZ结构域蛋白1（型肝炎病的NS5A反转录蛋白8）抗体anti- OCTN2 antibody神经调节素1(NRG1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA KitBCL7B蛋白抗体anti- ODAM antibody神经调节素1(NRG1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human TGF-β1 (Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit 性核蛋白2(锌指蛋白basonuclin2)抗体anti- ODC1 antibody膜联蛋白A2(ANXA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human VEGF-A (Vascular Endothelial Cell Growth Factor A ) ELISA Kit Bcl2 alpha蛋白抗体anti- ODC1 antibody表皮调节素(EREG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human EREG (Epiregulin) ELISA KitB细胞转录激活因子抗体anti- ODF1 antibody神经纤维素2(NF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

Human LEP (Leptin) ELISA Kit脑钠通道蛋白1抗体anti- ODF2 antibody心型脂肪酸结合蛋白(FABP3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

大鼠胎儿表皮组织提取物Hieff Clone™ Multi One Step Pcr Cloning Kit多片段一步法（快速/无缝）克隆试剂盒原钙粘附蛋白18抗体Human GZMM(Granzyme M) ELISA Kit髓鞘相关糖蛋白抗体试剂盒

Hieff Clone™One Step Pcr Cloning Kit一步法（快速/无缝）克隆试剂盒原钙粘附蛋白20抗体Human NQO1(NAD(P)H dehydrogenase [quinone] 1) ELISA Kit髓鞘相关糖蛋白试剂盒

Hieff Mut™ Multi Site-Directed Mutagenesis Kit多点突变试剂盒原钙粘附蛋白8抗体Human NR1I3(Nuclear receptor subfamily 1 group I member 3) ELISA Kit髓鞘性蛋白抗体试剂盒

XYLENE CYANOLE F.F 二苯青、C.I. 42135; Acid blue 147原钙粘附蛋白α1抗体Human CRHBP(Corticotropin-releasing factor-binding protein) ELISA Kit髓鞘蛋白P0试剂盒

VITAMIN B12 钴胺素、Cyanocobalamin原钙粘附蛋白α3抗体Human APOM(Apolipoprotein M) ELISA Kit髓脂性蛋白试剂盒

Uridine 5′-triphosphate trisodium salt hydrate (UTP)、尿苷-5-三酸三钠盐原钙粘附蛋白α4抗体Human APOD(Apolipoprotein D) ELISA Kit髓脂P2蛋白试剂盒

SPERMIDINE 亚精胺原钙粘附蛋白α5抗体Human CXCR4(C-X-C chemokine receptor type 4) ELISA Kit髓过物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG试剂盒

RETINOIC ACID、、 Vitamin A Acid、Tretinoin; Aberel; Airol; Aknoten; Cordes Vas; Dermairol; Retin-A; Vesnaroid原钙粘附蛋白α9抗体Human AMY2(Amylase Alpha 2, Pancreatic) ELISA Kit髓过物酶试剂盒