【产品简介】
产品名称：α1酸性糖蛋白(α1-AGP)测定试剂盒说明书
英文名称：α1-AGP (Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit
规格：48T/96T
货号：XG-E63210
需自备试剂和器材：
1． 标准规格酶标仪。
2． 自动洗板机。
3. 37℃恒温箱。
4． 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时**用多通道移液器。
5． 干净的试管和 Eppendof 管。
6． 使用中性 PBS 或 TBS 作为洗涤液。0.01M TBS 配法为：1000ml H2O 中加 Tris 1.2g, NaCl 8.5g; 纯乙酸 450μ l 或浓盐酸 700μ l 左右调节 pH 值(7.2-7.6)。0.01 M PBS（pH7.2-7.6） 配法：1000ml 蒸馏水中加氯化钠 8.5g, Na2HPO4 1.4g, NaH2PO4 0.2g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。
9. 蒸馏水
10. 吸水纸
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
实验步骤:
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）备注：有些抗原勿需修复，直接进入第 5 步封闭。
5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育30 min；
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min；
12.加 HRP-SA： 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37℃湿盒中孵育 30min；
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
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磷酸化核转录因子NFKB-RelB蛋白抗体
磷酸化Ras相关GTP结合蛋白抗体
转录因子RelB蛋白抗体
复制因子A蛋白2
磷酸化复制因子A蛋白2抗体
Ras相关GTP结合蛋白抗体
磷酸化ras基因相关蛋白Rab24抗体
磷酸化ras基因相关蛋白Rab24抗体
磷酸化G蛋白信号转导调节因子19抗体
磷酸化G蛋白信号转导调节因子19抗体
磷酸化/激酶p90RSK蛋白抗体
磷酸化Rad51抗体
磷酸化成骨特异性转录因子抗体
磷酸化G蛋白信号转导调节因子19抗体
G蛋白信号转导调节因子19抗体
环指蛋白1抗体
原癌基因c-Met相关激酶抗体
磷酸化原癌基因c-Met相关激酶抗体
肿瘤血管内皮调节蛋白Robo4抗体
轴突导向受体抗体
络丝蛋白抗体
RUSC1抗体
RUSC2抗体
RAGEF2蛋白抗体
G蛋白偶联受体RAB23抗体
G蛋白信号调节因子14抗体
核转录因子NF-κB受体/核因子kB受体活化因子抗体
磷酸化急性髓细胞白血病1蛋白抗体
磷酸化蛋白酶体PSMβ7抗体
根蛋白抗体
视网膜母细胞瘤样蛋白2抗体
维甲酸受体G抗体
α1酸性糖蛋白(α1-AGP)测定试剂盒说明书Rho GTP酶激活蛋白1/血管畸形骨肥大综合征相关蛋白抗体
磷酸化Rho GTP酶激活蛋白1/血管畸形骨肥大综合征相关蛋白抗体
环指蛋白87
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
