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产品名称 | 规格 | 检测方法 | 货号 |
肉桂醇脱氢酶（CAD)测试盒微量法 | 100管/96样 | 微量法 | BK-01S6925 |
商品介绍：
测定意义: CAD是木质素生物合成途径中的关键酶之一，是木质素单体合成反应中的最后一步，催化多种不同的肉桂醛（香豆醛、芥子醛以及松柏醛等）生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。 测定原理： CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH，在340nm下测定NADPH生成速率，即可反映CAD活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
试剂组成和配制:
提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存。
实验结果判断我有妙招：
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2～3SD，作为阳性结果的阈值。
3、以P／N值(阳性孔OD值／阴性孔OD值)大于或等于2．1为阳性，P／N值小于2．1，但大于1．5为可疑，P／N小于1．5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法：加入底物经酶解和终止反应后，肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照，与阴性对照的颜色接近者，判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求：
① 易挥发、低燃点的试剂要密封，放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气，水发生反应的物质要密封，并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂，应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放其水溶液，亚硫酸，氢硫酸溶液要密封存放，钾，钠，白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存，其相应的溶液较固体更易反应，所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封，放于阴凉通风处保存。
操作步骤：
1. 样品的准备：
a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。
b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。
d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P1511）测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。
e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。
2. 试剂盒的准备工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。
注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。
b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。
c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。
50 mg S-Methyl-ITU . sulfate（iN0S抑制剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
250mL Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++) Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++) 常温保存
10uL HRP标记的抗辛抗体 Anti DIG Ab,HRP 4℃保存
2 ug pAD-SV40T pAD-SV40T 低温运输，-20℃保存
吐温80营养琼脂 Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 250g
1瓶 M-619细胞株 M-619 低温运输和保存
10mL TE缓冲液，PH8.0
10U 二酯Ⅱ Phosphodiesterase Ⅱ -20℃保存
1000mL TBE Running Buffer,10X TBE Running Buffer,10X 常温保存
100次 蛋白折叠试剂盒 Protein Folding Kit 4℃保存
2 ug pSUPER pSUPER 低温运输，-20℃保存
肉桂醇脱氢酶（CAD)测试盒微量法CDCA1/Nuf2 细胞分裂周期相关蛋白1抗体 规格: 0.2ml
GRM2+GRM4 促代谢型谷受体2+4抗体 规格: 0.2ml
Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的羊抗人IgM 规格: 0.1ml
phospho-Tau protein(Ser202) 磷酸化微管相关蛋白抗体 规格: 0.1ml
CP110 中心体蛋白110抗体 规格: 0.2ml
factor V 凝因子5抗体 规格: 0.1ml
Calsequestrin 肌钙集蛋白/收钙素抗体 0.2ml
CD9/MRP-1 CD9蛋白抗体 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的兔抗猴IgM 规格: 0.1ml
UAP56/BAT1 ATP-依赖的RNA解旋p47抗体 规格: 0.1ml
C17orf59 17号染色体开放阅读框59抗体 规格: 0.2ml
Phospho-RSK2(Tyr529) 磷酸化核糖体S6激RSK2抗体 规格: 0.1ml
