线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。低中等水平的超氧化物的产生对于许多重要细胞过程的适当调节至关重要，这些过程包括基因表达，信号转导和肌肉对耐力运动训练的适应性。不受控制的线粒体超氧化物的产生会触发细胞氧化损伤，从而导致多种疾病的发病机理，包括癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和衰老。Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒使用我们*的超氧化物指示剂来定量活细胞中的超氧化物水平。MitoROS 580具有活细胞渗透性，可以快速，选择性地靶向线粒体中的超氧化物。与超氧化物反应时会生成红色荧光。该检测试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在培养一小时后检测活细胞中的线粒体超氧化物。该试剂盒针对流式细胞仪应用进行了优化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒。
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| Ex: | 488 nm |
| Em： | 575/26 nm |
| 通道: | PE 通道 |
样品实验方案
简要概述
准备细胞密度为0.5-1×10 6细胞/ mL
用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物
将1 µL 500X MitoROS 580加到0.5 mL细胞悬液中
将细胞在37°C染色1小时
使用带有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度
溶液配制
储备溶液配制
1. MitoROS 580储备溶液（500X）：将100 µL DMSO（组分C）添加到MitoROS 580（组分A）小瓶中，并充分混合以制成500X MitoROS 580储备溶液。避光。注意：请密闭存放。
实验步骤
对于每个样品，在自备的0.5 mL生长培养基或缓冲液中制备细胞，密度为5×10 5至1×10 6个细胞/ mL。注意：应单独评估每种细胞系，以确定超氧化物诱导的细胞密度。
在分析缓冲液（组分B）或自备的缓冲液（例如PBS）中用25 µL 20X测试化合物处理细胞以诱导超氧化物。对于对照细胞（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。
将细胞在37°C孵育至少30分钟。注意：将 Jurkat细胞在37°C下用50 µM抗霉suA（AMA）处理30分钟以诱导超氧化物。有关详细信息，请参见图1。
将0.5 µL细胞悬浮液中加入1 µL 500X MitoROS 580储备液。
在37°C下孵育1小时。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在MitoROS 580孵育之前用含血清的培养基洗涤一次。适当的孵育时间取决于单个细胞的类型和测试使用的化合物。
使用带有FL2通道的流式细胞仪（Ex / Em = 488/590 nm）检测荧光强度。
