荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的染色细菌的试剂盒，AAT Bioquest的染色试剂盒提供了一种新颖的一步荧光测定法，用于确定活菌中的革兰氏菌。革兰氏染色是在临床和研究环境中对细菌进行分类的重要且广泛使用的方法。原始方法涉及很多步骤，例如热固定，两步染色方案，酒精提取和复染。这些步骤可能会导致不一致的染色。 AAT Bioquest的一站式工具包消除了更多步骤，从而克服了出现的问题。该试剂盒使用了荧光标记的伴刀豆球蛋白A（ConA），这是一种凝集素，可选择性地与暴露于革兰氏阳性细菌表面的N-乙酰氨基葡糖结合。当革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌用荧光标记的ConA共轭物染色时，只有革兰氏阳性菌发出红色荧光。染色的细菌可以通过荧光监测。因为与其他现有染料相比，我们试剂盒中使用的荧光标记ConA共轭物显示出更高的亮度和光稳定性。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | 650 nm |
| Em： | 669 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 滤波片组: | Cy5 滤波片组 |
样品实验方案
简要概述
1.准备细菌样本
2.准备并添加IF647-ConA
3.在黑暗中于室温下将细菌样品与IF647-ConA孵育5-15分钟
4.去除IF647-ConA染色溶液并重悬于测定缓冲液中
5.使用Cy5滤光片组通过荧光显微镜分析样品
溶液制备
1.储备溶液配制
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1IF647-ConA储备溶液（100X）：
向IF647-ConA小瓶（组分A）中加入100 µL测定缓冲液（组分B），并充分混合。 注意：将储备溶液储存在-20ºC，避免光照，并以较小的等分试样储存，以避免重复的冻融循环。
样品示例及操作
1.细菌样品的制备
1.1在适当的培养基中使细菌生长到对数后期。 准备细菌样品，浓度范围为106到108个细胞/ mL。 注意：在波长= 600 nm（OD600）处测量细菌培养物的光密度，以确定细胞数。 对于大肠杆菌培养，OD600 = 1.0等于8 x 108细胞/ mL。
1.2通过以10,000 x g离心5分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分B）中。
2.染色方案
2.1向100 µL细菌样品中加入1 µL IF647-ConA储备溶液（100X）。
2.2充分混合，然后在室温下于黑暗中孵育5-15分钟。
2.3以10,000 x g离心5分钟，然后除去IF647-ConA染色溶液。
2.4重悬于100 µL分析缓冲液（组分B）中。
2.5使用荧光显微镜通过Cy5（Ex / Em = 650/669 nm）通道监控细菌的荧光。 注意：该协议仅提供指导，应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。 如果观察到更高的背景，则可以在成像之前添加一个可选的检测缓冲液（组分B）洗涤步骤。
