免疫原klh偶联肽选自拟南芥FUM蛋白序列,线粒体(FUM1): P93033, TAIR: At2g47510,胞质(FUM2): UniProt Q9FI53, TAIR: At5g50950
主机的兔子
单克隆多克隆
纯度血清
格式冻干
量50µl
调整
重建时加入无菌水50µl
原剂型抗体可在-20°C保存一年。此外,抗体可在2°C - 8°C下保存1个月,且活性无明显下降。避免将稀释后的抗体反复冻融。
Western blot (WB)
推荐的稀释
1:1000 (WB)
在提取缓冲液[100 mM NaCl;50mm Tris-HCl pH 7.5;0.5% (v/v) Triton X-100;德勤约1毫米;1×完整蛋白酶抑制剂鸡尾酒片(Roche, Bassel, Switzerland)], 55°C在Laemeli缓冲液中变性5分钟。蛋白提取物50µg:拟南芥野生型(1)、fum2-1突变体(2)、fum2-1 + GFP-FUM2 N1(3)、fum2-1 + GFP-FUM2 N2(4)、fum2-1 + GFP-FUM2 N3(5)、fum2-1 + GFP-FUM2 N3(6)、无蛋白-GFP、fum2-2(8)在半干转运体系中进行PVDF膜印迹1h。在室温下用3%牛奶搅拌堵塞膜1h,然后用稀释1:2 000的一抗(抗fum)在室温下用TBS-T和3%牛奶搅拌1h。将抗体溶液倒出,将印迹在TBS-T中短暂冲洗三次,时间为5分钟。印迹用匹配的Agrisera二抗(抗兔IgG马萝卜过氧化物酶结合AS09 602)在室温下搅拌,稀释至1:5 000,孵育1h。如上所述,印迹洗净,使用化学发光检测试剂在凝胶Doc XR+系统(Bio-rad;赫拉克勒斯;美国)。
fu1突变体是致命的,因此在fu2 -1和fu2 -2背景中仍然存在约60 kda的条带。