适用于酿酒酵母,毕氏酵母,裂殖酵母电转感受态细胞制备及转化。产品说明:
1.操作简单,单溶液制备,除酵母培养的时间外,整个操作只需要 30 余分钟。
2.制备得到的感受态细胞可以 -80℃保存6个月,方便多次使用.免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。(暂时未实现.建议现制现用)
3.zuigao转化效率可达到 0.2-1x10°个转化子 /ug 质粒 DNA。
4.得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒 DNA 进行转化,例 如 YIp，YRp，YCp,YEp和 YAC 等。-
5.可以用于酵母双杂交、定点突变(Site-Directed Mutagenesis)、基因破坏(GeneDisruption)、等位突变基因修复(Mutant Allele Recoverv)等实验。(一)酵母电转感受态细胞的制备:
1.菌种活化。-80℃保存的菌种在固体 YPDA培养基上四区划线,在30℃培养2-4天待酵母单菌落长至2 mm 长时,接种。
注:4℃保存2周内的酵母平板可以直接进行挑菌复苏,保存时间越长,酵母的活性越低;不要使用4℃
保存一个月以上的平板进行实验。
2.挑取 2mm 酵母单菌落接种到 3 mL 液体 YPDA 培养基中,30℃过夜培养。
3.第二天转接到含有 50 mL 液体 YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待 OD600到 1.0-1.5左右(相当
于1x10'细胞/mL)。冰上放置 15 分钟
注:(1).可用 4℃保存一个月内的的酵母菌培养产物 3mL 接种 50mLVPDA培养基过夜培养后，离
心收集细胞,用于下游实验。此步可以节约菌种活化，小摇所需的时间，
(2)。不同菌种对应的zuishiOD 值有差异,不同的 OD 会影响最终电转感受态细胞的转化效率:如有
必要可以摸索zuishi条件。
4.收集细胞:4℃3000g，离心5min，去上清。用 50ml的冰冷的灭菌水重悬。建议重复洗涤一次;
5.用 20 mL 冰冷的溶液A 悬浮、洗涤沉淀:4℃ 3.000 g.离心5min,去上清。
6.沉淀中加入 0.5 mL 冰冷的的溶液B悬浮,既获得酵母感受态细胞。按 50-100uL 分装于1.5mL 无菌冻存管(可直接用于转化)。
