荧光原位杂交( FISH )技术是检测生物样本中特定核酸靶标的有效工具。核酸靶标的原位检测是通过互补序列的荧光染料标记的核酸探针与样品杂交实现的。ReadiLink iFluor 488 FISH 荧光成像试剂盒是使用iFluor 488标记的FISH探针通过原位杂交标记目标DNA的便捷工具。ReadiLink iFluor 488 FISH 荧光成像试剂盒提供Taq DNA聚合酶，通过聚合酶链式反应( Polymerase Chain Reaction，PCR )将iFluor ® 488 - dUTPs掺入目标DNA中。我们的iFluor 染料比传统的荧光标记物更亮、更稳定，提供了所需的分辨率和信号。
适用仪器
| Thermal Cycler | |
| 推荐孔板: | PCR微孔板 |
实验方案
操作步骤
使用前，将所有组分解冻至室温，涡旋充分混合。
注：以下方案可作为标准DNA FISH的通用指南。请根据自己的实验进行方案的修改或优化。
1.配制如下反应混合液，见表1
每个反应每孔的试剂组成
| 成分 | 体积 (25 µL/反应) | 最终浓度 |
| FISH反应混合物 (2X) | 12.5 µL | 1X |
| 上游引物, 10 µM | 0.25-2.5 µL | 0.1-1.0 µM |
| 下游引物, 10 µM | 0.25-2.5 µL | 0.1-1.0 µM |
| 模板DNA | 1-5 µL | 优化浓度 |
| iFluor 488-dUTP | 2.5 µL | |
| dNTP 混合物 | 1 µL | |
| 水，无核酸酶 | 25 µL |
2.通过缓速涡旋，然后用短暂的离心机小心地混合试剂
3.在qPCR仪中置板，按下表2操作
表2 .热循环参数
参数 | 聚合酶活化 | PCR (30-40 个周期) | ||
持续温度 | 变性 | 退火 | 延长 | |
温度 | 95 °C | 95 °C | 55-65 °C | 68-72 °C |
时间 (m:ss) | 0:20 | 0:30 | 1:00 | 1:00 |
