Invitrogen SuperScript III 第一链合成系统试剂盒
用于 RT-PCR 的 SuperScript™ III 第一链合成系统经过优化，以从纯化 poly(A)+ 或总 RNA 合成第一链 cDNA。使用该系统可检测 100 bp 至 >12 kb 的 RNA 靶标。起始材料量的范围为 1 pg – 5 µg 总 RNA。SuperScript™ III 反转录酶是一款 M-MLV 反转录酶，其经过基因改造以降低 RNase H 活性和提高热稳定性。该酶可用于在 42–55°C 温度范围内合成 cDNA，相对于其他反转录酶，具有更高的特异性和 cDNA 得率以及更多的全长产物。因为 SuperScript™ III RT 不会受到核糖体和转运 RNA 的显著抑制，所以其可用于从总 RNA 制备物合成第一链 cDNA 的过程。
使用 SuperScript™ III 第一链系统
在第一步中，使用总 RNA 或 poly(A)+ 选定 RNA（由 oligo(dT)、随机引物或基因特异性引物引发）合成 cDNA 。在第二步中，在另一根管中使用目标基因特异性引物进行 PCR。对于 PCR 反应，我们推荐使用以下 DNA 聚合酶之一：Platinum™Taq DNA 聚合酶可提供自动热启动条件，使特异性提高至 4 kb，Platinum™Taq 高保真 DNA 聚合酶可为高达 15 kb 的靶标提供更高的得率和高保真度，而 Platinum™Pfx DNA 聚合酶可为高达 12 kb 的靶标提供极大保真度。
Invitrogen SuperScript III 第一链合成系统试剂盒
规格
内容与储存
• Oligo(dT)20，50 μL (50 μM)
• 随机六聚体，250 μL (50 ng/μL)
• 10X RT 缓冲液，1 mL
• DTT，250 μL (0.1 M)
• 氯化镁，500 μL (25 mM)
• dNTP 混合物，250 μL (10 mM)
• SuperScript III RT，50 μL (200 U/μL)
• RNaseOUT，100 μL (40 U/μL)
• 大肠杆菌 RNase H，50 μL (2 U/μL)
• DEPC 处理水，1.2 mL
• 总 HeLa RNA，20 μL (10 ng/μL)
• 正义链对照引物，25 μL (10 μM)
• 反义链对照引物，25 μL (10 μM)
储存在 –20°C 下。
