电子无菌车间臭氧消毒机#食品车间杀菌臭氧发生器

洁净车间用食品厂臭氧机灭菌后沉降菌检测方法

      洁净车间灭菌方法有多种：紫外线灭菌、化学熏蒸、臭氧灭菌等；这里简单介绍臭氧灭菌后对洁净车间沉降菌的检测":

A:操作方法：对洁净车间用食品厂臭氧机{车间臭氧机}灭菌1小时后进行沉降菌检测

 B:名称：洁净区微生物检测操作规程

C:关键词：洁净区、食品厂臭氧机、车间臭氧机、微生物检测

D:目的：寻得优质食品厂臭氧机、车间臭氧机厂家并规范洁净区微生物检测

E:原理：臭氧灭菌技术

F:适用范围：100级、1万、10万、30万级洁净区环境。

1.        沉降菌检测

1）       在万级洁净区内的关键操作点和洁净室内每周检测一次沉降菌和浮游菌；在10万级洁净区内其检测频次为每月检测一次。30万级每季度检测一次沉降菌。

2）       由微生物检测员按《养基的配制操作规程的要求配制肉汤琼脂培养基，培养皿使用Φ90mm×15mm，于121℃湿热灭菌20分钟，取出备用。

3）       做好洁净区消毒工作，开启洁净区净化空调系统，正常运行不少于30分钟；对单向流如100级的净化工作台和层流罩要在净化系统运行10min后开始。

4）       静态测试在除测试人员外，室内无生产人员的情况下进行，动态测试在已处于正常生产状态下进行。

5）       采样点布置选用对角线法，要求布置地面四个方向，工作线上左右，关键设备顶上放置一个。

6）       万级、10万级、30万级的zui少采样点数可按下表确定。

在满足zui少测点数的同时，还宜满足zui少培养皿数，见下表

7）       百级区只有净化工作台下的局部范围，其面积小于10m2，因此百级区取样点至少为3个。

8）       测试人员按洁净室级别规定的程序更换洁净服进入洁净区；静态测试时，室内人员不得多于2人。

9）       将制备好的肉汤琼脂培养基按采样点布点位置离地0.8～1.5m处放置，打开培养皿盖，暴露30分钟，检测人员及时填写记录，记录房间温湿度，压差及测试状态。

10）    盖好皿盖，将培养皿倒置于恒温培养箱内，在30～35℃中培养48小时，并用3只培养皿作对照。

11）    用透射光于培养皿背面或正面仔细观察平皿上所有菌落数，要注意菌落与培养基沉淀物的区别，然后用5～10倍放大镜检查有否遗漏。

12）    计算平均菌落数=（M1＋M2……＋Mn）／n，式中M1：1号培养皿菌落数，M2：2号培养皿菌落数，n：培养皿数。

13）    用平均菌落数判断洁净室空气中的微生物，洁净区的平均菌落数（静态测试）：100级≤1个/皿，万级≤3个／皿，10万级≤10个／皿，30万级≤15个／皿。

14）    如超过标准，则必须对此区域重新消毒，重新采样两次，测试结果均须合格；否则要向质量管理部通报，并采取相应的措施。

15）    检测人员必须向QA部门发“洁净级别检测记录”，取样和微生物培养及检测人员均要在记录上签名，QA部门主管审核，记录由质量管理部保存三年。

2.        浮游菌检测

1）       对万级和10万级洁净区要进行浮游菌的检测，在万级区内的关键操作点和洁净室内每周检测一次，10万级洁净区内其检测频次为每月检测一次。

2）       浮游菌取样使用浮游菌采样器，采样器必须要有流量计和定时量，并按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性。

3）       采样器进入被测房间前要先用消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器是一直放在房间内；采样时使用规定为Φ150mm×15mm培养皿。

4）       由微生物检测人员按《培养基的配制操作规程》的要求配制营养琼脂培养基，于121℃湿热灭菌20分钟，取出备用。

5）       浮游菌取样与沉降菌一样可分为静态测试和动态测试两种状态；各种洁净度的采样点数目和zui小采样量如下表所示。

浮游菌取样点数目及zui小采样量

灭菌原理

臭氧是一种强氧化剂，灭菌过程属生物化学氧化反应。臭氧灭菌有以下3种形式：

1.臭氧能氧化分解细菌内部葡萄糖所需的酶，使细菌灭活死亡。

2.直接与细菌、病毒作用，破坏它们的细胞器和DNA、RNA，使细菌的新陈代谢受到破坏，导致细菌死亡。

3.透过细胞膜组织，侵入细胞内，作用于外膜的脂蛋白和内部的脂多糖，使细菌发生通透性畸变而溶解死亡。

臭氧杀菌

灭活机理

臭氧对细菌的灭活反应总是进行的很迅速。与其它杀菌剂不同的是：臭氧能与细菌细胞壁脂类双键反应,穿入菌体内部，作用于蛋白和脂多糖，改变细胞的通透性，从而导致细菌死亡。臭氧还作用于细胞内的核物质，如核酸中的嘌呤和嘧啶破坏DNA。

灭活机理

臭氧对病毒的作用首先是病毒的衣体壳蛋白的四条多肽链，并使RNA受到损伤，特别是形成它的蛋白质。噬菌体被臭氧氧化后，电镜观察可见其表皮被破碎成许多碎片，从中释放出许多核糖核酸，干扰其吸附到寄存体上。

臭氧杀菌的*性是不容怀疑的。

臭氧杀菌原理

臭氧灭菌或抑菌作用，通常是物理的、化学的及生物学等方面的综合结果。其作用机制可归纳为：（1）作用于细胞膜，导致细胞膜的通透性增加，细胞内物质外流，使细胞失去活动；（2）使细胞活动必需的酶失去活性；（3）破坏细胞内的遗传物质或使其失去功能。臭氧杀灭病毒是通过直接破坏核糖核酸或脱氧核酸完成的。而杀灭细菌、霉菌类微生物则是臭氧首先作用与细胞膜，使细胞膜的构成收到损伤，导致新陈代谢障碍并抑制其生长，臭氧继续渗透破坏膜内组织，直到死亡。

臭氧灭菌

人类自发现并使用臭氧以来，一直对臭氧的灭菌性能进行试验[1]，这方面的试验报告很多，以下从几个方面进行综述。

臭氧－细菌繁殖体

李怀恩等观察了臭氧气体对空气中绿脓杆菌的杀灭作用。在15℃，湿度73%，臭氧浓度0.08-0.6ppm时，30分钟内杀灭率达到99.9%以上；伍学洲等试验臭氧对大肠杆菌杀灭率为*，对*杀灭率为95.9%，对绿脓杆菌杀灭率为89.8%，顾士圻等试验，臭氧对大肠杆菌和*杀灭率分别为99.7%、99.9%。居喜娟等试验用臭氧可杀灭空气中的白色葡萄球菌99.99%；Burleson等试验将臭氧气体通入染有*、大肠杆菌、荧光假单胞菌、鼠伤*、福氏痢疾杆菌、霍乱弧菌的磷酸盐缓冲液中，作用15秒后，以上细菌全部杀灭；白希尧等发现臭氧水溶液杀菌作用强大，且速度极快，浓度为0.3mg/L的臭氧水溶液作用1分钟，大肠杆菌和*的杀灭率均达*。

细菌芽胞

瞿发林等报告，以5.5mg/m?的臭氧作用下45分钟，可将100mL塑料瓶内滴染的枯草杆菌黑色变种芽胞*杀灭；居喜娟等报道，在1m?试验柜内，开启500mg/h的臭氧发生器60分钟可对空气中的枯草杆菌黑色变种芽胞杀灭率达99.95%；欧阳川等在动态试验条件下，将臭氧气体通入染菌井水中，臭氧浓度达3.8-4.6mg/L时，作用3-10分钟，水中枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭率达99.999%。

病毒

李绍忱等试验发现，经10.3mg/m3浓度臭氧作用30分钟后，乙型肝炎表面抗原（HbsAg）的滴度从1:256降至1:64。史江等报告，臭氧浓度13.6mg/m3时使用30分钟，使HbsAg破坏99.99%，使用甲型肝炎病毒抗原（HAAg）破坏*；Wolo等实验证明0.5ppm的臭氧可灭活空气中的甲型流感病毒99%；Herbold等报告，在20℃水中，臭氧浓度为0.13mg/L时，可以*的灭活脊髓灰质炎病毒I型（PVI）。臭氧灭活病毒速度极快，当臭氧浓度分别为0.09mg/L-0.8mg/L时，在反应zui初5秒钟内，噬菌体T2即可被灭活5-7个对数值。Finch发现水中含臭氧浓度40μg/L时，作用20秒钟，可使大肠杆菌噬菌体ms2灭活4个对数值。Vaughn等在4℃条件下，对比了臭氧对猿轮状病毒SA-H和人轮状病毒2型的灭活效果,发现两种病毒均能被0.25mg/L的臭氧迅速灭活。Crpend等检测了经臭氧处理后的血清中爱滋病毒（HIV）的灭活情况，证明当臭氧浓度为4mg/L时，可将滴度为106CID50/mL HIV全部灭活，病毒滴度下降6个对数值。

真菌

汪华明等报道,臭氧浓度为9.6mg/L时，作用100分钟对杂色曲霉与桃色拟毒霉的杀灭率达*，对蜡叶枝孢霉23mg/L30分钟、青黑霉在12.5mg/L作用35分钟、桔青霉在15.4mg/L作用30分钟，尖镰孢霉在15.5mg/L时作用20分钟，均可达*灭活率。对于烟曲霉、细交链孢霉、爪哇毛霉等，在臭氧浓度为3.85-10.7mg/L时作用10-20分钟灭活率达96.4%。伍学洲等发现，臭氧在30分钟内对青霉菌的杀灭率为93.8%，对毛霉菌的杀灭率为*；白希尧等报告，浓度为15mg/L的臭氧水溶液作用1分钟，可*地杀灭试验中的黑曲霉和酵母。

原虫

Finch等比较了22℃时臭氧对兰氏贾弟鞭毛虫和鼠型贾弟鞭毛虫色曩的灭活效果，当Ct值0.86mg•min/L时，可使鼠型贾弟鞭毛虫减少4个对数值，Ct值为2.5mg•min/L时，使兰氏贾弟鞭毛虫减少4个对数值。Korich等比较了臭氧、二氧化氯、氯对净化水中的微小隐孢子虫卵囊的灭活作用试验证明，1ppm的臭氧作用5分钟可以灭活90%的卵囊，1.3ppm的二氧化氯则需作用1小时，80ppm的氯则需作用1.5小时才能达到同样效果。

臭氧杀菌消毒

臭氧杀菌机理以氧化作用破坏微生物膜的结构实现杀菌作用。臭氧对细菌的灭活反应总是进行的很迅速，与其它杀菌剂不同的是：臭氧能与细菌细胞壁脂类双键反应,穿入菌体内部，作用于蛋白和脂多糖，改变细胞的通透性，从而导致细菌死亡。臭氧还作用于细胞内的核物质，如核酸中的嘌呤和嘧啶破坏DNA。臭氧首先作用于细胞膜，使膜构成成份受损伤而导致新陈代谢障碍，臭氧继续渗透穿透膜而破坏膜内脂蛋白和脂多糖，改变细胞的通透性，导致细胞溶解、死亡。臭氧灭活病毒则认为氧化作用直接破坏其核糖核酸RNA或脱氧核糖核酸DNA物质而完成的。臭氧对病毒的作用首先是病毒的衣体壳蛋白的四条多肽链，并使RNA受到损伤，特别是形成它的蛋白质。噬菌体被臭氧氧化后，电镜观察可见其表皮被破碎成许多碎片，从中释放出许多核糖核酸，干扰其吸附到寄存体上。