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ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置

时间:2013-5-5阅读:365
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ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础,ELISA试剂以及各种溶液如何配置?zui近刚做了下ELISA实验,把各种ELISA配置方法汇总如下:(1) ELISA实验包被缓冲液(2) ELISA实验洗涤缓冲液(2) ELISA实验洗涤缓冲液(3) ELISA实验稀释液;(4)ELISA实验终止液(5)ELISA底物缓冲液(6)ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液(7) ELISA实验ABTS使用液(8)ELISC。

试剂

(1) ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):

NaHCO3    1.59克

NaHCO3  2.93克

加蒸馏水至1000ml

(2) ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M

KH2PO4         0.2克

Na2HPO4·12H2O  2.9克

NaCl          8.0克

KCl         0.2克

Tween-20 0.05%   0.5ml

加蒸馏水至1000ml

(3) ELISA实验稀释液:

牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

加洗涤缓冲液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。

(4) ELISA实验终止液(2M H2SO4):

蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。

(5) ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):

0.2M Na2HPO4(28.4克/L)              25.7ml

0.1M 柠檬酸(19.2克/L)      24.3ml

加蒸馏水50ml。

(6) ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液:

TMB(10mg/5ml无水乙醇)   0.5ml

底物缓冲液(PH5.5)      10ml

0.75%H2O2                           32μl

(7) ELISA实验ABTS使用液:

ABTS        0.5mg

底物缓冲液(PH5.5)     1ml

3%H2O2                          2μl

(8)ELISA实验封闭液:

牛血清白蛋白(BSA) 5克

加洗涤缓冲液至100ml。

值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉,不适合长期保存。

生物帮推荐ELISA相关产品,详情见:封闭试剂、终止溶液、封闭肽、ELISA稀释液、ELISA试剂盒、ELISA缓冲液、ELISA洗脱缓冲液

为了保证ELISA实验的准确性,实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要,将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔,严防交叉污染。

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