植物基因组DNA的RFLP

时间：2013-6-6阅读：268

植物基因组DNA的RFLP

实验原理

DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间，也存在于同一种植物的不同个体之间。RFLP多态性是指DNA限制性内切酶酶切片段长度的多态性（restniction fragment length olymophorphism）。由于碱基顺序的差异，在不同的种或同一个种的不同个体之间，它们的基因组DNA限制性内切酶位点的种类和数目不同，经特定的限制性内切酶切割后，所产生的限制性酶切片段在大小（长度）和数目方面自然也存在着差异。通过琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙锭染色，在紫外检测仪下观察，即可直接看到这种差异。电泳分离后，通过Southern杂交也可显示出已知DNA的差异。

实验试剂

1. 限制性内切酶

2. 10×限制性内切酶缓冲液

3. 0.5M EDTA（pH 8.0）

4. 溴化乙锭

5. 琼脂糖

实验设备

1. 电泳仪和电泳槽

2. 微量离心管

3. 低温冰箱

4. 37℃水浴锅

实验材料

从不同植物或同一植物不同个体分离出的基因组DNA。

实验步骤

1. 限制性内切酶酶切

1）将在-20℃冷冻的DNA在冰上融化。

2）取8支微量离心管按下表所示作好标记，并依次加入所需成分。

	品种I		品种II		品种I－1		品种II－2
	单酶切 1#	双酶切 2#	单酶切 3#	双酶切 4#	单酶切 5#	双酶切 6#	单酶切 7#	双酶切 8#
DNA	10	10	10	10	10	10	10	10
10×缓冲液	2	2	2	2	2	2	2	2
Eco R I		1	1	1	1	1	1	1
Hind III		1		1		1		1
无菌水	7	6	7	6	7	6	7	6
总体积（ul）	20	20	20	20	20	20	20	20

3）混匀，慢速离心2秒，使溶液全部聚于管底。

4） 37℃保温2－3小时。

5）加入1／10体积的0.5M EDTA溶液终止反应。

2. 琼脂糖凝胶电泳分析

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