影响ELISA试剂盒实验的因素
选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
标本收集与保存：
避免使用肉眼可见的溶血标本、高脂标本和混浊标本；
2-8℃下，标本可放置24-48小时，长期保存需放置-20℃下。
请避免反复冻融。
试剂使用中的准备工作及注意事项：
试剂盒中会有提示，一般需要准备的有：
洗涤液；用前配制；有的试剂盒会标明，配好的4度下一般可以放一个月；如果没有标明，尽量用新鲜的，不要多配制。
显色液（有A液和B液的），用前15分钟配制；
标准品：有的试剂盒中标准品是已经配制好的，4度保存；有的是要现配制的；按照说明书操作；
浓缩*结合的二抗和HRP：如果需要配制，试剂盒没注明配好可以保存多久的话，尽量现配现用（用前15分钟配制）；
熟悉加样器的使用，在进行实验之前用水来练习加样的快速和准确；
试验前标本需缓慢升温至室温，若标本为血清，冻结血清融解後，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清後再检测；
加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出；
加样後及时放入孵箱；
加酶试剂後用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干；
如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他後处理仪器加酶试剂；
标本较多时，请分批操作。每次加样在两到三分钟内完成。加标本时三排一加。每次加完样进行计时；
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
本试剂不同批号组分不得混用。
温 育：
不好的操作原因：
温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*；
温育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。
解决办法：
贴封片或加盖：为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜复盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。
按说明步骤严格控制操作时间。
建议采用空气浴进行温育。
参考ELISA实验操作中的温育（incubation）
洗 板：
结果不好的可能原因
采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；洗板不畅，导致洗板效果差。
反应板过多造成洗板等待时间长。
在间接法中如本底较高。
在ELISA 操作中，洗涤是zui主要的关键技术，操作时尤为注意：
保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板後在吸水纸或毛巾（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干（若使用易掉渣的纸，纸屑会留在板孔中，由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性。）；
严谨的设计，的试剂，正确的操作和良好的仪器是保证ELISA必要条件。在实际操作中必须严格遵照规定操作，以严谨的作风检测每一份标本，才能保证试验效果。
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