荧光定量PCR检测HBV-DNA ELISA方法测定

 荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强等特点，能更准确反映出HBV感染者血清中病毒含量，ELISA法检测人体对乙型肝炎（乙肝）病毒的免疫反应状态。将两者结合，分析HBV感染者整个病程中血清抗原、抗体的转化过程及与HBV DNA的相关性。 1 资料与方法 1.1  一般资料：选取2011年1月～2011年12月我院住院、门诊乙型肝炎患者、体检者共3 120例及健康对照20例。

1.  HBV DNA荧光定量检测：仪器采用ROTOR GENE 3000实时荧光定量PCR仪。HBV DNA试剂盒购自购自中山大学达安基因股份有限公司。定量结果采用求算对数平均值的方法来计算HBV DNA平均拷贝数。 1.3  HBV免疫学标志物检测：采用ELISA方法检测HBV标志物，ELISA试剂盒购自厦门英科新创科技有限公司。 人ELISA试剂盒

2 结果　　根据乙肝五项指标的不同，我们对3 120例血清标本的分析结果做分组，并统计HBV DNA结果。HBV DNA检测结果与免疫学指标结果的比较 乙肝五项指标 例数 HBV DNA阳性数[例（%）] HBV DNA含量（IU/ml） 1.HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性组 1 148 1 111（96.8）① 7.94±0.34 2.HbsAg、抗Hbe、抗HBc阳性组 1 357 699（51.5）② 4.57±2.07 3.HBsAg、抗HBc阳性组 551 267（48.5）③ 4.33±1.12 4.抗HBs阳性组 64 2（3.1） 3.96 5.阴性正常人血清 20 1（5.0） 3.11 注：②、③与①比较，P＜0.01 3 讨论　　我们对3 120例乙肝患者及体检者、20例乙肝五项指标阴性的健康对照同时进行免疫学指标和HBV DNA荧光定量PCR检测。人ELISA试剂盒

说明HBeAg（+）乙肝患者HBV处于大量复制阶段，患者具有高度传染性，与文献报道一致[1]。2组 HBV DNA检出率为51.5%，3组HBV DNA检出率为48.5%，HBV DNA拷贝数差异很大，说明免疫学指标结果相同的患者，其体内HBV DNA浓度存在很大差异。2组HBV DNA检出率达51.5%，HBV DNA含量较1组低，因此，系统转换并不能说明HBV停止复制，可能与病毒变异等因素有关.说明患者体内是否有病毒复制及其拷贝数单靠ELISA方法检测HBV标志物是无法准确判断的，而必须进行HBV DNA的定量检测。抗HBs是保护性抗体，但本实验中64例抗HBs阳性者中仍有2例检出HBV DNA，这与文献报道的结果相符，说明抗HBs阳性者并非*没有传染性，因此对抗HBs阳性者判断其是否具有传染性仍需通过检测HBV DNA来加以分析。人ELISA试剂盒　　

值得注意的是HBVM全阴的20例标本中，有1例PCR阳性.这种阳性的存在，可能是病毒感染早期，抗原﹑抗体尚未形成；患者免疫功能低下，不产生免疫应答或患者出现免疫耐受现象，ELISA无法测出相应的抗原﹑抗体．或者是HBV s区基因变异致HbsAg抗原性变异，不能被ELISA方法检出；或者前C区变异致不能产生HBeA。人ELISA试剂盒

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