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上海哈灵生物科技有限公司
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单胺氧化酶试剂盒说明书
2024-11-1 阅读(76)
一、测定意义：
单胺氧化酶(MAO，EC1.4.3.4)是一种广泛存在于脊椎动物器官中的酶，尤其是在分泌腺、脑和肝脏中含量较高。它也在无脊椎动物和某些植物中发现，尽管含量较低。MAO在催化单胺类物质代谢中发挥着关键的生理作用，其活性水平可以作为肝纤维化程度的一个指标。此外，MAO活性的异常可能导致细胞内单胺类神经递质的代谢紊乱，从而引发多种疾病。
二、测定原理：
MAO催化反应产生过氧化氢(H2O2)，而过氧化物酶在氧气存在的情况下能够催化H2O2分解产生的氧，进而氧化邻联茴香胺形成有色物质。这种颜色的深浅与单胺氧化酶的活性呈线性关系，因此可以通过颜色的变化来定量分析MAO的活性。
三、实验用品及仪器：
天平
低温离心机
可见分光光度计/酶标仪
微量石英比色皿/96孔板
蒸馏水
四、试剂组成和配制：
提取液一：液体，100mL/瓶，需4℃保存。
提取液二：液体，100mL/瓶，需4℃保存。
试剂一：液体，20mL/瓶，需4℃保存。
试剂二：液体，4mL/瓶，需4℃保存。
试剂三：液体，1mL/支，需4℃保存。
五、粗酶液提取步骤：
样品处理：
称取约0.1g样品，加入1mL预冷的提取液一，充分冰浴匀浆。
1000g，4℃，离心10分钟，弃去沉淀。
将上清液转移到另一预冷的离心管中，10000g，4℃，离心30分钟，弃去上清液。
加入1mL预冷的提取液二，震荡混匀。
16000g，4℃，离心40分钟，弃去上清液。
沉淀物中加入预冷的1mL生理盐水或PBS，震荡混匀，得到粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定)。
细菌、真菌处理：
按照细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为500~1000：1的比例(建议500万个细胞加入1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3分钟)。
10000g，4℃，离心10分钟，弃去沉淀。
将上清液转移到另一预冷的离心管中，10000g，4℃，离心30分钟，弃去上清液。
加入1.0mL预冷的提取液二，震荡混匀。
16000g，4℃，离心40分钟，弃去上清液。
沉淀物中加入预冷的1.0mL生理盐水或PBS，震荡混匀，得到粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定)，取上清液置于冰上待测。
血清处理：
直接进行MAO活性测定。
以上是MAO活性测定实验的指导，希望对您的实验有所帮助。请确保在实验过程中严格遵守安全操作规程，并在专业指导下进行。
