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ELISA原理酶联免疫吸附测定的四种方法
2013-8-29 阅读(1028)
ELISA原理酶联免疫吸附测定
抗体或抗原可以吸附在合适的载体上，酶标记抗体或抗原相应的抗原或抗体形成酶标记的抗原抗体免疫复合物，在一定量底物的参与下，酶催化底物在复合物上水解，氧化或还原成为另一种带色的物质。因为在特定的条件下，酶的降解底物和出现光彩是成正比的，所以可以应用分光光度计进行测定，从而计算出到场反应的抗原和抗体的含量。这便是Peter Perlmann 和Eva Engvall所创建的ELISA技术的原理。
根据所用固相载体的区别，ELISA又分为普通ELISA和Dot-ELISA。
按照抗体或抗原在固相载体上不同的吸附方式，又根据使用不同的抗体比如能与抗原直接发生反应的抗体（通常称为一抗），能与一抗起免疫联合反应的标有酶的抗体（通常称为酶标二抗），ELISA分解出多项不同测定方式。
ELISA一样通常分为一下几种类型：
（1）直接法：起首将抗原吸附于载体外貌，然后将酶标记抗体与该抗原反应结合，形成酶标记的免疫复合物，zui后参加底物产生有色的物质，进行光密度测定，算出抗体存在量。
（2）间接法：首先将抗原吸附于载体表面，然后加抗血清，使特异性抗体（*抗体）与抗原结合，再加酶标记抗球卵白（第二抗体，即抗*抗体的抗体），与*抗体结合，形成酶标记的免疫复合物，zui后加入底物产生有色的物质，进行光密度测定，算出抗体存在量。
（3）双重抗体法：首先将抗体吸附于载体表面，形成抗体球卵白致敏载体表面，然后加抗原溶液，使抗原与抗体结合，再加入酶标志的抗体球卵白，与被致敏载体表面吸附的抗原结合，形成酶标记的免疫复合物，zui后加入底物产生有色的物质，进行光密度测定，算出抗原存在量。ELISA双重抗体法也称ELISA双重抗体夹心法，此法能削弱非特异颜色的干扰，而且在测定时可不做空白比较。
（4）酶标志抗原竞争法：首先将抗体吸附于载体表面，形成抗体球卵白的致敏载体表面，然后加入以不一样比例混合的抗原和酶标记的抗原溶液，与吸附在载体上的抗体产生免疫反应，形成酶标记抗原与抗体的免疫复合物和非标记抗原与抗体的免疫复合物，zui后加入底物，通过酶的底物水解量（测定光密度而知）来确定未知溶液有无抗原及抗原量数量。
酶标志抗原竞争法利用混合的未标记的抗原和酶标志抗原相互竞争抗体上的结合点，从而进行抗原的定量。未标记的抗原的量越大，则酶标记抗原和抗体的结合就越受到抑制。但是竞争法在实行时比较繁琐，有时候在抗原混合液与相应抗体孵育后，在测定游离抗原与抗体相结合抗原的活性以前，要行盐析或有机溶剂沉淀或第二抗体沉淀等方式把两种不同存在形态的抗原分开。而且在参加底物后，容易产生血清色的物质。因此，每次测定时都需做空白对照。因为这些缺点，酶标记抗原竞争法很少使用。
