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RPMI-1640培养基的制备以及说明
2013-11-19 阅读(4125)
在实验中我们经常会用到RPMI-1640培养基，但遗憾的是关于RPMI-1640培养基却很少有人仔细研究。RPMI-1640培养基是RoswellParkMemorialInstitute的缩写，代指洛斯维，1640则是培养基代号。其中含有10%胎牛血清。
实验中使用的RPMI-1640培养基通常都需要自己配制。而配制过程中需要注意到很多细节，否则就会影响到RPMI-1640培养基的效果。总结一下关于RPMI1640培养基的需知，可分为以下几点：
1.配制培养基新制备的三蒸水（即经过三次蒸馏收集的水，一般多用于，生物和医疗上的检验）是*选择。一般在试验前当天制备，前一天也可。注：调节pH值的酸碱溶液也应该使用这种水配制。
2.培养液（配制方法不仔细介绍，自己可查）配好后，先抽取少许放入培养瓶内，置于37℃温箱内24～48hr，用以检测培养液是否有污染。
3.溶解培养基，过程为将干粉培养基溶于总量1/3的水中，再用水洗包装袋内面两次，再倒入培养液中，振荡即可。注：一般不要加热助溶。
4.补加试剂，即是根据包装袋说明和试验需要加入NaHCO3（2.0g）、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等试剂。
5.加抗生素，一般青霉素终浓度为100U/ml，链霉素为100U/ml。但市售青霉素为80万U/瓶，可溶于4ml体积，所以每一升培养液中加0.5ml即可。市售链霉素则为100万U/瓶，可溶于5ml体积，所以每一升培养液中也加0.5ml即可。注：无链霉素的情况下，也可用庆大霉素代替，终浓度调为50～200U/ml即可。
6.调pH值，培养基中加水到900ml（在需要加10%小牛血清的情况下），然后用5%NaHCO3调节pH到7.2为止。
7.过滤除菌：zui宜采用0.45um和0.22um滤膜各一张，上层为0.45um，下层为0.22um，可保证过滤的效果。注：滤膜正面（即是光面）要朝上。过滤后分装于小瓶中（100或200ml）。
8.每次配液，都需要的其他辅助性液体（例如Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）也可以同时配制，分别再过滤。
9.每次配液量以两周左右为zui宜，一次配液不可太多，太多则会造成营养成分（主要为谷氨酰胺）的损失，zui后造成实验繁琐或者污染。
10.zui后，必须注意制备培养基的器皿清洗要干净，烤干后备用（滤器、滤膜、量筒、移液管及盛放培养基的小瓶等存放和转移培养基液体的器具都应进行灭菌）。
注意：RPMI-1640培养基中需加入10%的小牛血清。关于小牛血清加入的注意事项不做仔细介绍，自己可查。培养基的配制过程及其注意事项大家都已清楚，但仅是清楚还并不足够，我们更多的要动手去做。实践不仅是检验真理惟一标准，更是检验一个人的标准。
实验中使用的RPMI-1640培养基通常都需要自己配制。而配制过程中需要注意到很多细节，否则就会影响到RPMI-1640培养基的效果。总结一下关于RPMI1640培养基的需知，可分为以下几点：
1.配制培养基新制备的三蒸水（即经过三次蒸馏收集的水，一般多用于，生物和医疗上的检验）是*选择。一般在试验前当天制备，前一天也可。注：调节pH值的酸碱溶液也应该使用这种水配制。
2.培养液（配制方法不仔细介绍，自己可查）配好后，先抽取少许放入培养瓶内，置于37℃温箱内24～48hr，用以检测培养液是否有污染。
3.溶解培养基，过程为将干粉培养基溶于总量1/3的水中，再用水洗包装袋内面两次，再倒入培养液中，振荡即可。注：一般不要加热助溶。
4.补加试剂，即是根据包装袋说明和试验需要加入NaHCO3（2.0g）、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等试剂。
5.加抗生素，一般青霉素终浓度为100U/ml，链霉素为100U/ml。但市售青霉素为80万U/瓶，可溶于4ml体积，所以每一升培养液中加0.5ml即可。市售链霉素则为100万U/瓶，可溶于5ml体积，所以每一升培养液中也加0.5ml即可。注：无链霉素的情况下，也可用庆大霉素代替，终浓度调为50～200U/ml即可。
6.调pH值，培养基中加水到900ml（在需要加10%小牛血清的情况下），然后用5%NaHCO3调节pH到7.2为止。
7.过滤除菌：zui宜采用0.45um和0.22um滤膜各一张，上层为0.45um，下层为0.22um，可保证过滤的效果。注：滤膜正面（即是光面）要朝上。过滤后分装于小瓶中（100或200ml）。
8.每次配液，都需要的其他辅助性液体（例如Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）也可以同时配制，分别再过滤。
9.每次配液量以两周左右为zui宜，一次配液不可太多，太多则会造成营养成分（主要为谷氨酰胺）的损失，zui后造成实验繁琐或者污染。
10.zui后，必须注意制备培养基的器皿清洗要干净，烤干后备用（滤器、滤膜、量筒、移液管及盛放培养基的小瓶等存放和转移培养基液体的器具都应进行灭菌）。
注意：RPMI-1640培养基中需加入10%的小牛血清。关于小牛血清加入的注意事项不做仔细介绍，自己可查。培养基的配制过程及其注意事项大家都已清楚，但仅是清楚还并不足够，我们更多的要动手去做。实践不仅是检验真理惟一标准，更是检验一个人的标准。
