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上海哈灵生物科技有限公司
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吖啶橙染色液说明书
2015-5-27 阅读(1035)
简介：吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。哈灵生物吖啶橙染色液(1mg/ml)为储存液，使用时应稀释到合适浓度后使用。染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
规格：10ml 保存条件：4℃ 避光
操作步骤(仅供参考)：
1、 收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用PBS清洗细胞1次，计数并调节 细胞浓度至106/ml。
2、 取适量的细胞悬液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，轻轻混匀。
3、 室温避光染色15～20ml，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm)，计数并拍照。
染色结果：正常细胞 细胞被均匀染成黄绿色荧光凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒
注意事项：
1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜剂，较少单独使用。
2、吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
3、如有低温离心机进行离心效果更佳。
4、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
