意图请求 

1．把握通常培育基制备的准则和请求。

2．了解通常培育基制备的进程。 

操作过程 

培育基的制备准则和请求 

培育基是依据各类微生物成长繁衍的需求，用人工办法把多种物质混合而成的养分物。通常用来别离、培育菌类。常用的培育基有基础培育基、增菌培育基、挑选培育基、鉴别培育基和厌氧培育基。在制备培育基时，应把握如下准则和请求： 

   培育基有必要富含细菌成长繁衍所需求的养分物质。所用的化学药品有必要纯洁，称取的份量必须。培育基的酸碱度应契合细菌成长请求。按各种培育基请求测定调理pH值。多数细菌成长的适合pH值为7.2～7.6，呈弱碱性。 

培育基的灭菌时刻和温度，应按照各种培育基的规定进行，以确保灭菌作用及不丢失培育基的必需养分成分。培育基经灭菌后，有必要置37℃温箱中培育24小时，无菌成长者方可应用。所用器皿须洁净忌用铁或钢质器皿，请求没有按捺细菌成长的物质存在。 制成的培育基应该是通明的，以便调查细菌成长性状以及别的代谢活动所发生的改变。

培育基制备进程 

 不一样的培育基其制备办法也不一样，通常包含以下过程：

（一）称量试剂 依据不一样的菌类和用处，挑选适合的培育基，培育基所需试剂有必要纯洁。 

（二）校对pH值 将称量好的培育基各种成分放入容器内，符号划线，加热溶解，弥补水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精细试纸或酸度计测定。用1N 

NaOH和1N HCl调理pH值到适合范围内。

（三）过滤 将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培育基倒入其间过滤至通明。

（四）分装 将过滤后的培育基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，预备灭菌。 

（五）灭菌 

培育基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。通常微生物的养分细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能到达*灭菌的意图。依据蒸汽温度随压力增加而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因而，在同一温度条件下，选用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法作用要好。并且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝结变性，由于蒸汽的穿透力强，灭菌作用好。 高压蒸汽灭菌，通常选用15磅／平方（即1.05kg／cm2）压力，此刻的温度是121.3℃。灭菌20～30分钟后，可到达*灭菌的意图。在进行灭菌的时候，首要要把灭菌锅内的冷空气排出，否则，冷空气存在会下降锅内的实践温度，影响灭菌作用。

三、基础培育基的制备 

（一）牛肉浸液（肉水）

1．成分 新鲜牛肉 500g ，水1000 ml。

2．制法 

（1）取新鲜牛肉，除掉肌膜、脂肪，切成小块，用绞肉机绞碎。

（2）按上述比例加水，浸泡24小时（夏天应将浸泡液放置在低温的当地，防止腐败；假如没有冷藏条件时，可省去浸泡24小时这一步），其间应拌和数次。

（3）次日取上液煮沸一小时，并不断拌和。

（4）补足蒸腾的水分，用白布或绒布过滤后分装于三角瓶中，预备灭菌。

（5）置高压灭菌器内，15磅灭菌20～30分钟，置低温、暗处保留备用。 

3.用处 

用于制备各种培育基的基础液。

（二）肉浸液肉汤（通常肉汤） 

 1．成分 肉水 1000 ml ，蛋白胨 10g，氯化钠 5g，磷酸氢二钾 2g。 

2．制法 

（1）将以上成份加温溶于牛肉浸液中。

（2）调pH值为7.4～7.6。

（3）滤纸过滤后分装。 

（4）15磅20～30分钟灭菌后备用。

3．用处 作通常细菌培育用。

（三）养分琼脂培育基（通常琼脂） 

1．成分 肉水 1000ml，蛋白胨10g，磷酸氢二钾 lg ，氯化钠 5g，琼脂 20g。 

2．制法

（1）将上述成分混合后，加热溶解，补足水份。

（2）校对pH值7.4～7.6。 

（3）用纱布夹棉花过滤。

（4）分装于中试管或三角瓶中。

（5）高压灭菌20～30分钟后，将中试管摆成斜面，保留备用。 

3．用处 通常细菌别离培育、菌种保留或用作特别培育基。 

（四）半固体培育基 基本上与养分琼脂的制备相同，仅将琼脂量削减至0.5～0.7％（1000 ml中加5～7g琼脂）即可。 

（五）鲜血琼脂

将灭菌的养分琼脂加热溶化，冷却至45～50℃时，参加5～8％无菌脱纤鲜血（绵羊、黄牛、马和兔等），分装于试管后当即摆成斜面、或倾注于平皿中，待凝结后，置37℃培育1～2日。有污染者抛弃；无菌者保留，置冰箱备用。 

无菌脱纤维鲜血的制备：以无菌操作采取动物鲜血（绵羊、黄牛、马从颈静脉采血；兔则从心脏采血），放入带玻璃珠的无菌三角瓶内，摇摆5～10分钟，放冰箱中备用。