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上海哈灵生物科技有限公司
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一氧化氮（NO）试剂盒说明书
2015-8-17 阅读(1682)
货号HL012 硝酸还原酶法）
一、测定意义：
NO化学性质活泼，体内代谢转化为亚硝酸盐（NO3）、血清（NO3）与（NO3）浓度之和（NO3＋NO2）才能准确代表体内NO水平。血清（NO3+NO2)含量测定，国内有的单位采用金属镉还原法，但该法操作繁琐（血清需除蛋白），反映不易控制（金属镉可将NO2进一步还原），且不能*讲NO3还原为NO2，准确差。
本测试法为一种灵敏、简便、快速、稳定、易推广的方法。
二、测定原理：
NO化学性质活泼，在体内代谢很快转为NO2和NO3，而NO2又进一步转化为NO3，本法利用硝酸还原酶特异性将NO3还原为NO2，通过显色深浅测定其浓度的高低。
三、试剂的组成和配制（50T/48样）：
试剂一：液体6mlX2瓶，-20℃以下保存3个月。用前放37℃水浴或室温使溶解后再用。
试剂二：液体6mlX2瓶，-20℃以下保存3个月。用前放37℃水浴或室温使溶解后再用。
混合试剂的配制：按试剂一：试剂二=1：1配制，用多少配多少，配好后充分混合后
待用，现用现配24小时内有效。
试剂三：液体12mlX1瓶，室温保存6个月。
试剂四：液体6mlX1瓶，室温保存6个月。
试剂五：粉剂X1支，用时加90℃~100℃热双蒸水20ml【注1】充分溶解，避光保存。
试剂六：粉剂X1支，用时加双蒸水8ml，避光冷藏保存，当颜色变成深咖啡色不可在用。
试剂七：液体8mlX1瓶，室温保存6个月
显色剂的配制：需都少配多少。试剂五：试剂六：试剂七=2.5：1：1.若能在一个月
内用完者也可一次配成。剩余显色剂置于盛双蒸水的40ml方瓶中，避光保存。天冷
会有结晶析出，再次使用时，放100℃水浴，反复摇动溶解后使用。
10mmol/L标准品贮备液：0.5mlX1支，-20℃以下保存6个月。
100μmol/L 标准品应用液的配制：取0.1ml 10 mmol/L 标准品贮备液用双蒸水定容稀
另附：配试剂五、试剂六及标准品的双蒸水40mlX2瓶。
【注1】：试剂五为过抱和溶液，所以在配制时用90℃~100℃的热双蒸水23ml（热胀冷缩）边隔水加热边用玻璃棒搅拌，以使其充分溶解。一次实验用不完再用时可能仍有结晶，用之前可以再次边隔水加热边玻璃棒搅拌使其溶解。（隔水加热；取干净的小烧杯倒入试剂五，再加入90℃~100℃的热双蒸水23ml，再将此小烧杯放在另一有热水的盆或锅或烧杯中，注意千万别把小烧杯中的试剂弄翻。这时用玻璃棒将小烧杯中的试剂搅拌溶解，试剂五溶液一次实验用不完再用时可能仍有结晶，用之前盛有试剂五溶液的小烧杯放在另一有任谁的盆或锅或烧杯中，注意千万别把小烧杯中的试剂弄翻。这时用玻璃棒将小烧杯中的试剂搅拌溶解。）
- 试剂的组成和配制（25管/24样）：
试剂一：液体6mlX1瓶，-20℃以下保存3个月。用前放37℃水浴或室温使溶解后再用。
试剂二：液体6mlX1瓶，-20℃以下保存3个月。用前放37℃水浴或室温使其溶解后再用。
混合试剂的配制：按试剂一：试剂二=1：1配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，现用现配24小时内有效。
试剂三：液体6mlX1瓶，室温保存6个月。
试剂四：液体3mlX1瓶，室温保存6个月。
试剂五：粉剂X1支，用时加90℃~100℃热双蒸水10ml【注2】充分溶解。避光保存。
试剂六：粉剂X1支，用时加双蒸水4ml，避光冷藏保存，当颜色变成深咖啡色不可再用。
试剂七：液体4mlX1瓶,室温保存6个月。
显色剂的配制；需多少配多少。试剂5：试剂六：试剂七=2.5：1：1.若能在一个月
冷会有结晶析出，再次使用时，放100℃水浴，反复摇动溶解后使用。
10mmol/L标准贮备液：0.5mlX1支，-20℃以下保存6个月。
100μmol/L标准品应用液的配制：取0.1ml 10mmol/L 标准品贮备液用双蒸水定容稀释至10ml(即100倍稀释），混匀，即为100μmol/L标准品应用液，现用现配。
另附：配试剂五、试剂六及标准品的双蒸水40mlX1瓶。
【注】：试剂五为过饱和溶液，所以在配置时用90℃~100℃的热双蒸水13ml（热胀冷缩）边隔水加热边用玻璃棒搅拌使其充分溶解。一次实验用不完再用时可能仍有结晶，用之前可以再次边隔水加热边玻璃棒搅拌使其溶解。（隔水加热；取干净的小烧杯倒入试剂五，再加入90℃~100℃的热双蒸水13ml，再将此小烧杯放在另一有热水的盆或锅或烧杯中，注意千万别把小烧杯中的试剂弄翻。这时用玻璃棒将小烧杯中的试剂搅拌溶解，试剂五溶液一次实验用不完再用时可能仍有结晶，用之前把盛有试剂五溶液的小烧杯放在另一有热水的盆或锅或烧杯中，注意千万别把小烧杯中的试剂弄翻。这时用玻璃棒将小烧杯中的试剂搅拌溶解。）
五、操作步骤：
（一）、血清、胃液、尿液、细胞培养液等标本的检测前处理。请参照《实验方法学》：
- 操作表：
空白管 | 标准管 | 测定管 | |
双蒸水（ml） | 0.1 | ||
100μmol/L标准品应用液（ml） | |||
样本（ml） | |||
混合试剂（ml） | 0.4 | 0.4 | 0.4 |
混匀，37℃准确水浴60分钟
试剂三（ml） | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
试剂四（ml） | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
充分旋窝混匀30秒，室温静置40分钟，3500~4000转/分，离心10分钟，取上清显色。
上清（ml） | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
显色剂（ml） | 0.6 | 0.6 | 0.6 |
混匀，室温静置10分钟，波长550nm，光径0.5cm，双蒸水凋零，测定各管吸光度值。
注意点：1、冬天测试时，所有的试剂均应置于37℃预热5分钟。
2、取上清时，如果上清量不够，请延长离心时间，或者少取一点。例如：可取0.4或0.45ml，但您同一批实验所有的管子都应取上清的量要一致，千万不可将沉淀吸上。
