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上海哈灵生物科技有限公司
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ELISA试剂盒样本中糖原的测定
2016-1-13 阅读(601)
实验原理
正常肝糖原的含量约占肝重的5%。许多因素可影响肝糖原的含量，入饮食、饥饿、糖皮质激素及肾上腺素等。
糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使后者进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛。此化合物再和蒽酮作用生成蓝色化合物，与用同法处理的标准葡萄糖溶液比色，即可推算出糖原含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前肝组织先放在浓碱中加热，破坏其他成分，而保留肝糖原。
实验方法
1.肝糖原的提取：取体重在25g以上的健康小白鼠1只，断头处死，剖腹取出肝脏，用生理盐水冲洗后，再用滤纸吸干水分，准确称取肝组织0.5g，放入盛有30% KOH溶液1.5ml的试管中，置沸水浴煮20分钟（肝组织必须全部溶解，否则影响比色），取出后冷却，将试管内容物全部移入100ml的容量瓶（用蒸馏水多次洗涤试管，一并收入容量瓶内），加蒸馏水至刻度，仔细混匀。
2.糖原的测定：取干净试管3支，编号后按表1-6加样，混匀后，置于废水浴中10分钟，冷却后选用620nm的单光色，用空白管调零，测定2.3管的吸光度。
表1-6
3.计算：
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注意事项
1.此法测定值在肝糖原含量为1.5-9%之间。若肝糖原小于1%时，由于蛋白质的干扰测定结果不准确，须改用间接法测定，即在肝组织消化后用95%乙醇沉淀肝糖原（1:1.25），离心分离，用蒸馏水2ml溶解肝糖原，再按1-6表操作。
2.公式中的1.11为此法测得葡萄糖含量换算成糖原含量的常数，即100μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于111μg糖原用蒽酮试剂所显之色。
