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上海哈灵生物科技有限公司
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公司信息
精子细胞氧化应激活性氧NBT比色法定量检测试剂盒
2016-2-29 阅读(1015)
主要用途
精子细胞氧化应激活性氧（ROS）NBT比色法定量检测试剂是一种旨在通过硝基蓝四氮唑染料，受到超氧阴离子O2-的还原，产生不溶性蓝黑色色素沉淀，由分光光度仪比色分析，定量检测精子细胞内活性氧族的生成和增加的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于动物和人体精子细胞的活性氧族的检测。可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。其中精子细胞（spermatozoa）对于活性氧较为敏感：低浓度活性氧可以调节正常精子功能、精子获能、顶体反应、精卵融合等；高浓度活性氧则影响精子细胞的质量和功能，因为精子细胞质膜含有大量不饱和脂肪酸，胞浆含有少量的祛除活性氧的相关酶蛋白，由此活性氧容易造成精子质膜的流动性和DNA完整性受到损害，精子运动能力降低，不能参与受精活动，zui终导致特发性不育症（idiopathic infertility）。染料四氮唑兰（tetrazolium）化合物，硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），是一种黄色水溶性硝基替代性芳香族四氮唑化合物，与细胞内超氧阴离子O2-反应而被直接还原，产生不溶性甲暨色素，在分光光度仪下（650nm波长），呈现吸光峰值的变化。据此定量检测精子细胞内氧化应激活性氧族的浓度。
实验步骤
一、样品预处理
1．移取2毫升新鲜收集（1小时内）的精液到2毫升锥形离心管
2．放进37℃培养箱孵育20分钟
3．放进台式离心机离心7分钟，速度为300g
4．小心抽去上清液
5．加入2毫升清理液（Reagent A），混匀精子细胞颗粒群
6．放进台式离心机离心7分钟，速度为300g
7．小心抽去上清液
8．加入适量的清理液（Reagent A）
9．充分混匀后，在血细胞计数器上进行精子细胞计数
10．调整精子细胞数为1 X 107/毫升
11．放进37℃培养箱里备用（1小时内）
注意事项
1．本产品为100次（96孔板）操作
2．操作时，须戴手套
3．孵育时，须避免光照
4．测试前，精子细胞须新鲜收集，1小时内为适合
5．精子细胞悬液制备后即刻测读，不宜过夜保存
6．精子细胞悬液须清澈
7．如果需要排除精液白细胞的干扰，建议纯化精子细胞：精子细胞高纯分离试剂盒（14003）
8．如果需要区分精液各种成分的活性氧生成情况，建议使用精浆（seminal plasma）氧化应激活性氧（ROS）NBT比色法定量检测试剂盒（14007.1）
9．本产品适合冻存的精子细胞检测
10．如果活性氧浓度过低，可以延长孵育时间至2小时
11．本公司提供系列精子细胞分析试剂产品
