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上海哈灵生物科技有限公司
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公司信息
线粒体呼吸链复合物III活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
2016-6-21 阅读(492)
主要用途
我公司线粒体呼吸链复合物III(辅酶Q-细胞色素C还原酶)活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用还原性合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂,通过反应系统测定样品中细胞色素C还原后峰值的增高,即采用比色法测定样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品(动物、人体、酵母)以及细胞或组织裂解悬液样品的辅酶Q-细胞色素C还原酶的特异性活性检测。可用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理身理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。
注意事项
- 本产品为21次操作(10个样本),包括1次背景对照测定
- 操作时,须戴手套
- 系统操作过程中,背景测定只需1次
- 线粒体样品检测前,须溶解;建议冻存融解(-70℃至37℃)循环3次
- 如果增强酶活检测,建议使用线粒体复合物待测样品预处理试剂盒-10342
- 每增加1个样品,增加反应工作液为:反应液(Reagent B)5微升+稳定工作液5微升,以此类推。配制反应工作液时,须根据样本数量配制实际工作液容量
- 用户可以根据实际样品,计算缓冲液(Reagent A)、反应工作液和底物液(Reagent D)三者之和,混匀后,室温下静置10分钟,置于冰槽里等待检测
- 加入样品启动反应后3秒内即刻比色测定
- 分光光度计波长严格设置在550nm,误差10nm将不产生信号
- 测定可以持续2分钟
- 测定值由低到高变化,即2分钟测定读数高于0分钟测定读数,表明有酶活性
- 比色测定后,比色皿须清洗*
- 建议用户使用分光光度仪检测,总体系减半可以增加检测样本数
- 建议待测样本线粒体蛋白浓度为10微克/100微升;如果样本酶活性过低或过高,则可以增加或降低样本量;注意计算公式的调整(本公司提供线粒体溶解试剂盒HL10018为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒HL30030.1)
- 如果使用细胞或组织裂解悬液,则蛋白浓度为50微克/100微升
- 样品特异活性是指抗霉素敏感的辅酶Q-细胞色素C还原酶,去除其它干扰因素(例如复合物I/II/IV等)
- 线粒体呼吸链复合物III(辅酶Q-细胞色素C还原酶)单位活性定义为:在30℃,pH 7.5条件下,每分钟内能够氧化1微摩尔还原型泛醌(CoQH2)所需的酶量作为一个活性单位
- 本公司提供系列线粒体及其酶类技术产品
- 如:
- 线粒体呼吸链复合物II(琥珀酸-辅酶Q还原酶)活性定量检测试剂盒
- 线粒体呼吸链复合物II(琥珀酸-辅酶Q还原酶)活性定量检测试剂盒
- 线粒体呼吸链复合物IV(正铁细胞色素C-氧化还原酶)活性定量检测试剂盒
- 线粒体呼吸链复合物V(F0F1-ATP酶/ATP合成酶)活性定量检测试剂盒