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上海哈灵生物科技有限公司
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公司信息
细胞活力蓝色荧光（DAPI）检测试剂盒产品说明书
2017-4-6 阅读(1065)
10008 v.A
细胞活力蓝色荧光（DAPI）检测试剂盒产品说明书
主要用途
细胞活力蓝色荧光检测试剂是一种旨在通过使用荧光染料DAPI与染色体DNA的结合并发出荧光检测信号来测定活体细胞和死亡细胞之比例的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适用于各种生长中的动物或人体细胞。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰。
技术背景
作为细胞DNA染色剂之一的4，6－二咪基－4-联苯基吲哚（ 4，6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特异性地与DNA双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与DNA的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激发波长356nm，使得DAPI成为了一种常用的荧光检测信号。
产品内容
缓冲液（Reagent A） 毫升
固定液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 微升
裂解液（Reagent D） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent C）避免光照，有效保证6月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（）：用于细胞脱离
*细胞培养液（）：用于混匀细胞的培养基
15毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器
台式离心机：用于细胞沉淀收集
1.5毫升离心管：用于细胞检测操作的容器
荧光显微镜：用于观察染色并具荧光的细胞
血细胞计数器：用于细胞计数
实验步骤
1． 开启荧光显微镜
2． 移取25cm2细胞培养瓶里的培养液到新的15毫升锥形离心管（收集所有漂浮细胞）
3． 加入xx毫升缓冲液（Reagent A）到细胞培养瓶，清洗生长中的细胞表面
4． 抽去xx毫升清洗液到15毫升锥形离心管
5． 加入xx毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面
6． 置入37℃培养箱1分种
7． 轻轻震动培养瓶，使细胞脱落，然后加入5毫升用户自备的*细胞培养液
8． 移入15毫升锥形离心管
9． 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g
10．小心抽去上清液
11．加入xx毫升缓冲液（Reagent A），充分混匀（注意：参见注意事项5）
12．移出xx微升细胞样品到1.5毫升离心管
13．加入xx微升固定液（Reagent B）到1.5毫升离心管
14．用手指轻轻弹动离心管，使其充分混匀
15．加入xx微升染色液（Reagent C）到离心管
16．用手指轻轻弹动离心管，使其充分混匀
17．移出xx微升离心管中的混匀物到血细胞计数器的前池
18．加入xx微升裂解液（Reagent D）到1.5毫升离心管
19．用手指轻轻弹动离心管，使其充分混匀
20．移出10微升离心管中的混匀物到血细胞计数器的后池
21．在（倒置）荧光显微镜（10倍）紫外波长下，观察并计数（注意：参见注意事项6）
22．血细胞计数器前池样品显示荧光细胞核的为死亡细胞，而血细胞计数器后池样品显示荧光细胞核的为细胞总数
23．确定活体细胞和死亡细胞的比例
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 本产品可用于悬浮细胞，直接从实验步骤8开始
3． DAPI为半通透性染料，不能染色活细胞
4． 本产品的裂解液（Reagent D）能够充分溶解红细胞，因此可用于计量血液中有核细胞
5． 建议待测细胞样品为每毫升1 X 106细胞浓度左右
6． 细胞计数时乘上稀释倍数104。标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是：
1毫米方块的细胞计数X 104（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升
7． 本产品可直接染色生长中的贴壁细胞，染色液和培养液比例为1：100
8． 本公司提供系列细胞繁殖和活力检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰
